脫(tuo)氫(qing)酶(dehydrogenase, DHA) 是壹(yi)類催(cui)化(hua)物(wu)質氧化(hua)還(hai)原(yuan)反應(ying)的酶(mei)，催化(hua)底物(wu)通過(guo)細(xi)胞(bao)色素系(xi)統被氧(yang)化，釋(shi)放的(de)能(neng)量(liang)供機體使用，是生(sheng)物體取(qu)得能量(liang)的壹(yi)種方式(shi)。
脫(tuo)氫(qing)酶試劑(ji)盒(he) 其他系(xi)列(lie)

脫(tuo)氫(qing)酶（dehydrogenase, DHA）試劑(ji)盒(he)說明書

微量(liang)法(fa) 100 管/96 樣(yang)

脫(tuo)氫(qing)酶試劑(ji)盒(he) 其他系(xi)列(lie)

正式(shi)測(ce)定(ding)前(qian)務必(bi)取(qu) 2-3 個預(yu)期差(cha)異(yi)較(jiao)大的樣本(ben)做預(yu)測定(ding)測(ce)定(ding)意義(yi)：

脫(tuo)氫(qing)酶(dehydrogenase, DHA) 是壹(yi)類催(cui)化(hua)物(wu)質氧化(hua)還(hai)原(yuan)反應(ying)的酶(mei)，催化(hua)底物(wu)通過(guo)細(xi)胞(bao)色素系(xi)統被氧(yang)化，釋(shi)放的(de)能(neng)量(liang)供機體使用，是生(sheng)物體取(qu)得能量(liang)的壹(yi)種方式(shi)。

測定(ding)原(yuan)理：

在(zai)細(xi)胞(bao)呼(hu)吸(xi)過(guo)程(cheng)中，氫受體 2, 3, 5 - 氯化三苯(ben)基(ji)四(si)氮唑（2,3,5-Triphenyl Tetrazolium Chloride, TTC）在(zai)脫(tuo)氫(qing)酶作用下接(jie)受(shou)氫(qing)以(yi)後，被(bei)還(hai)原(yuan)為三苯(ben)基(ji)甲鐟（Triphenyl Formazone, TF），TF 呈現紅(hong)色，於 485nm測定(ding)其(qi)吸光值(zhi)，即(ji)得脫(tuo)氫(qing)酶活性(xing)。

組成(cheng)：

試劑(ji)壹(yi)：粉劑(ji)×1 瓶(ping)，使用前(qian)加(jia) 10ml 試劑(ji)二溶(rong)解，4℃避光(guang)保(bao)存(cun)（盡量(liang)現配(pei)現用）。

自備(bei)儀器(qi)和用品(pin)：

篩子、天(tian)平、恒溫培養箱或(huo)水浴鍋、低(di)溫離心(xin)機、可(ke)見(jian)分(fen)光(guang)光(guang)度(du)計/酶(mei)標儀、微(wei)量(liang)石英比色皿(min)/96 孔板(ban)、冰、蒸(zheng)餾(liu)水、甲醇(chun)（不允許快(kuai)遞，請(qing)用戶(hu)自(zi)備）。

樣品(pin)處理：

1、細(xi)菌(jun)、真(zhen)菌(jun)：按(an)照細(xi)胞(bao)數(shu)量(liang)（104 個）：提取(qu)液體積（ml）為 500~1000：1 的(de)比例(li)（建議(yi) 500 萬(wan)細(xi)胞(bao)加(jia)入(ru) 1ml 提取(qu)液），冰浴超(chao)聲波破碎(sui)細(xi)胞(bao)（功(gong)率 300w，超(chao)聲 3 秒，間(jian)隔 7 秒，總時間(jian) 3min）；然(ran)後 8000g， 4℃，離心(xin) 10min，取(qu)上清(qing)置(zhi)於冰上待測。

2、組織(zhi)：按(an)照組(zu)織(zhi)質(zhi)量(liang)（g）：提取(qu)液體積(ml)為 1：5~10 的比(bi)例(li)（建議(yi)稱(cheng)取(qu)約 0.1g 組織(zhi)，加(jia)入(ru) 1ml提取(qu)液）進(jin)行(xing)冰浴勻(yun)漿，然(ran)後 8000g，4℃，離(li)心(xin) 20min。

3、液體：直接(jie)檢(jian)測(ce)。

測定(ding)步(bu)驟：

充(chong)分混(hun)勻(yun)，37℃培養 24h：

振蕩(dang) 1h，8000g，25℃，離心(xin) 5min，取(qu) 200μl 上清(qing)於微量(liang)石英比色皿(min)/96 孔板(ban)，測定(ding)A485，△A=A 測(ce)

定(ding)-A 空(kong)白(bai)管(guan)。空白(bai)管(guan)只要(yao)做(zuo)壹(yi)管。

脫(tuo)氫(qing)酶活力(li)計算：

用微(wei)量(liang)石英比色皿(min)測定(ding)的(de)計算公式(shi)如(ru)下

標準(zhun)曲(qu)線(xian)：y = 0.0422x - 0.0312；R2 = 0.9988；x 為(wei)標準(zhun)品濃(nong)度(du)（μg/ml），y 為吸(xi)光(guang)值(zhi)。

按(an)照蛋白(bai)濃(nong)度(du)計算(suan)

酶活單(dan)位(wei)定(ding)義(yi)：在(zai) 37℃時，每mg 蛋白(bai)樣(yang)品每min 催化產(chan)生(sheng) 1μgTF 為壹(yi)個酶(mei)活性(xing)單位(wei)。

DHA（μg/ min / mg prot）=（△A+0.0312）÷ 0.0422×V 反總÷（Cpr×V 樣）÷T= 0.181×（△A+0.0312）÷Cpr

按(an)照樣(yang)本(ben)質量(liang)計算(suan)

酶活單(dan)位(wei)定(ding)義(yi)：在(zai) 37℃時，每克(ke)樣(yang)品(pin)每min 催化產(chan)生(sheng) 1μgTF 為壹(yi)個酶(mei)活性(xing)單位(wei)。

DHA（μg/ min /g 鮮重）=（△A+0.0312）÷ 0.0422×V 反總÷（W×V 樣÷V 樣總）÷T= 0.181×（△A+0.0312）÷W

按(an)液體體積計算(suan)

酶活單(dan)位(wei)定(ding)義(yi)：在(zai) 37℃時，每ml 樣本(ben)每min 催化產(chan)生(sheng) 1μgTF 為壹(yi)個酶(mei)活性(xing)單位(wei)。

DHA（μg/ min /ml）=（△A+0.0312）÷ 0.0422×V 反總÷V 樣÷T= 0.181×（△A+0.0312）

V 反總：反應(ying)總體積，1.1ml；V 樣：加(jia)入(ru)反應(ying)體系(xi)中(zhong)樣本(ben)體積，0.1ml；T：培養時間(jian)，1d=1440min；W：樣品(pin)質量(liang)，g；Cpr：蛋白(bai)濃(nong)度(du)，mg/ml。

用 96 孔(kong)板(ban)測定(ding)的(de)計算公式(shi)如(ru)下

標準(zhun)曲(qu)線(xian)：y = 0.0211x - 0.0312；R2 = 0.9988；x 為(wei)標準(zhun)品濃(nong)度(du)（μg/ml），y 為吸(xi)光(guang)值(zhi)。

按(an)照蛋白(bai)濃(nong)度(du)計算(suan)

酶活單(dan)位(wei)定(ding)義(yi)：在(zai) 37℃時，每mg 蛋白(bai)樣(yang)品每min 催化產(chan)生(sheng) 1μgTF 為壹(yi)個酶(mei)活性(xing)單位(wei)。

DHA（μg/ min / mg prot）=（△A+0.0312）÷ 0.0211×V 反總÷（Cpr×V 樣）÷T= 0.362×（△A+0.0312）÷Cpr

按(an)照樣(yang)本(ben)質量(liang)計算(suan)

酶活單(dan)位(wei)定(ding)義(yi)：在(zai) 37℃時，每克(ke)樣(yang)品(pin)每min 催化產(chan)生(sheng) 1μgTF 為壹(yi)個酶(mei)活性(xing)單位(wei)。

DHA（μg/ min /g 鮮重）=（△A+0.0312）÷ 0.0211×V 反總÷（W×V 樣÷V 樣總）÷T= 0.362×（△A+0.0312）÷W

按(an)液體體積計算(suan)

酶活單(dan)位(wei)定(ding)義(yi)：在(zai) 37℃時，每ml 樣本(ben)每min 催化產(chan)生(sheng) 1μgTF 為壹(yi)個酶(mei)活性(xing)單位(wei)。

DHA（μg/ min /ml）=（△A+0.0312）÷ 0.0211×V 反總÷V 樣÷T= 0.362×（△A+0.0312）

V 反總：反應(ying)總體積，1.1ml；V 樣：加(jia)入(ru)反應(ying)體系(xi)中(zhong)樣本(ben)體積，0.1ml；T：培養時間(jian)，1d=1440min；W：樣品(pin)質量(liang)，g；Cpr：蛋白(bai)濃(nong)度(du)，mg/ml。

註意事(shi)項(xiang)：

配(pei)制(zhi)好的(de)試劑(ji)壹(yi)避光(guang)保(bao)存(cun)於 4℃，最(zui)好(hao)在(zai)壹(yi)周(zhou)內(nei)使用，若(ruo)出(chu)現紅(hong)色，則不能(neng)使用。

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