葡萄(tao)糖-6-磷酸酶（(glucose 6 phosphatase，G6Pase，EC 3.1.3.9）廣泛(fan)存在(zai)於(yu)動物(wu)、植物(wu)、微(wei)生物(wu)和(he)細胞(bao)中(zhong)，是(shi)糖異(yi)生(sheng)過(guo)程水(shui)解(jie)葡萄(tao)糖-6-磷酸生(sheng)成葡萄(tao)糖的(de)限(xian)制(zhi)酶，在(zai)保證(zheng)血(xue)糖的(de)動態(tai)平衡(heng)方(fang)面起(qi)著(zhe)重(zhong)要的(de)作用(yong)。
葡萄(tao)糖-6-磷酸酶G6P試(shi)劑(ji)盒 糖異(yi)生(sheng)系列(lie)

葡萄(tao)糖-6-磷酸酶（G6P)試(shi)劑(ji)盒說明(ming)書

微(wei)量法(fa) 100 管(guan)/96 樣

葡萄(tao)糖-6-磷酸酶G6P試(shi)劑(ji)盒 糖異(yi)生(sheng)系列(lie)

正(zheng)式測定(ding)前務(wu)必取(qu) 2-3 個(ge)預期差(cha)異(yi)較大(da)的(de)樣(yang)本做預測定(ding)測定(ding)意義(yi)：

葡萄(tao)糖-6-磷酸酶（(glucose 6 phosphatase，G6Pase，EC 3.1.3.9）廣(guang)泛(fan)存在(zai)於(yu)動物(wu)、植物(wu)、微(wei)生物(wu)和(he)細胞(bao)中(zhong)，是(shi)糖異(yi)生(sheng)過(guo)程水(shui)解(jie)葡萄(tao)糖-6-磷(lin)酸生(sheng)成葡萄(tao)糖的(de)限(xian)制(zhi)酶，在(zai)保證(zheng)血(xue)糖的(de)動態(tai)平衡(heng)方(fang)面起(qi)著(zhe)重(zhong)要的(de)作用(yong)。

測定(ding)原理：

G6P 催化(hua)葡萄(tao)糖-6-磷(lin)酸生(sheng)成葡萄(tao)糖，變(bian)旋酶和(he)葡萄(tao)糖脫(tuo)氫(qing)酶進壹(yi)步依次(ci)催化(hua)NAD⁺還(hai)原生成NADH，在(zai) 340nm 下(xia)測定(ding)NADH 生(sheng)成速(su)率(lv)，即可反(fan)映 G6P 活性(xing)。

組成：

自(zi)備(bei)儀器(qi)和(he)用品：

分光光度(du)計/酶標(biao)儀(yi)、臺式離心(xin)機、可調(tiao)式移液(ye)器(qi)、微(wei)量石(shi)英比(bi)色皿/96 孔(kong)板、研(yan)缽、冰和(he)蒸(zheng)餾水(shui)。

樣(yang)本的(de)前處理：

1、細菌(jun)或(huo)培(pei)養(yang)細胞(bao)：先收集細菌(jun)或(huo)細胞(bao)到離(li)心(xin)管(guan)內，離(li)心後(hou)棄(qi)上清；按(an)照(zhao)細菌(jun)或(huo)細胞(bao)數量(liang)（104 個）：提(ti)取(qu)液(ye)體(ti)積（ml）為(wei) 500~1000：1 的(de)比(bi)例（建議 500 萬(wan)細菌(jun)或(huo)細胞(bao)加(jia)入(ru) 1ml 提(ti)取(qu)液(ye)），超(chao)聲(sheng)波破(po)碎(sui)細菌(jun)或(huo)細胞(bao)（冰浴(yu)，功率 20％或 200W，超(chao)聲(sheng) 3s，間隔 10s，重(zhong)復(fu) 30 次(ci)）；8000g 4℃離(li)心 10min，取(qu)上清，置冰上待(dai)測。

2、組織(zhi)：按(an)照組織(zhi)質量（g）：提(ti)取(qu)液(ye)體(ti)積(ml)為(wei) 1：5~10 的(de)比(bi)例（建議稱(cheng)取(qu)約(yue) 0.1g 組織(zhi)，加(jia)入(ru) 1ml 提(ti)取(qu)液(ye)），進(jin)行(xing)冰浴(yu)勻漿。8000g 4℃離(li)心 10min，取(qu)上清，置冰上待(dai)測。

3、血(xue)清(qing)（漿）樣(yang)品：直(zhi)接(jie)檢(jian)測。

測定(ding)步驟(zhou)：

1、分光光度(du)計或酶標(biao)儀(yi)預(yu)熱(re) 30min 以(yi)上，調(tiao)節波(bo)長(chang)至 340nm，蒸(zheng)餾水(shui)調(tiao)零(ling)。

工(gong)作液(ye)的(de)配(pei)制(zhi)：臨(lin)用(yong)前將試(shi)劑(ji)二、試(shi)劑(ji)三和(he)試(shi)劑(ji)四(si)轉移到試(shi)劑(ji)壹中(zhong)混(hun)合溶(rong)解(jie)待(dai)用；用不完的(de)試(shi)劑(ji)分裝(zhuang)後(hou)-20℃保存，禁止(zhi)反復(fu)凍融。

2、將工(gong)作液(ye)置於(yu) 37℃(哺(bu)乳(ru)動物(wu))或 25℃(其(qi)它物(wu)種(zhong))預熱(re) 5 分鐘(zhong)。

3、在(zai)微(wei)量石(shi)英比(bi)色皿或 96 孔(kong)板中(zhong)加(jia)入(ru) 10μl 樣(yang)本和(he) 190μl 工作液(ye)，立(li)即混勻，記(ji)錄(lu) 340nm 處初始吸光值(zhi)A1 和(he) 2min 後(hou)的(de)吸(xi)光值(zhi) A2，計(ji)算(suan)ΔA=A2-A1。

註(zhu)意：在(zai)該試(shi)劑(ji)盒中(zhong)，若ΔA 大(da)於(yu) 0.3，需(xu)將樣(yang)本用(yong)提(ti)取(qu)液(ye)稀(xi)釋適當倍(bei)數後(hou)測定(ding)，使(shi)ΔA 小於(yu) 0.3 可提(ti)高(gao)檢測靈敏(min)度(du)。計(ji)算(suan)公(gong)式中(zhong)乘(cheng)以(yi)相應(ying)稀(xi)釋倍(bei)數。

G6P 活(huo)性(xing)計(ji)算(suan)：

用(yong)微(wei)量石(shi)英比(bi)色皿測定(ding)的(de)計(ji)算(suan)公(gong)式如(ru)下(xia)

1、血(xue)清(qing)（漿）G6P 活(huo)力計(ji)算(suan)

單位(wei)定(ding)義(yi)：每(mei)毫升血(xue)清(qing)（漿）每(mei)分鐘(zhong)生(sheng)成 1 nmol NADH 定(ding)義(yi)為(wei)壹個酶活力(li)單位(wei)。

G6P（nmol/min/ml））＝[ΔA×V 反(fan)總(zong)÷（ε×d）×109]÷V 樣÷T=1608×ΔA 2、組織(zhi)、細菌(jun)或(huo)細胞(bao)中(zhong) G6P 活(huo)力計(ji)算(suan)

按(an)樣本蛋(dan)白(bai)濃度(du)計(ji)算(suan)

單位(wei)定(ding)義(yi)：每(mei)mg 組織(zhi)蛋(dan)白(bai)每分鐘(zhong)生(sheng)成 1nmol NADH 定(ding)義(yi)為(wei)壹個酶活力(li)單位(wei)。

G6P（nmol/min/mg prot）＝[ΔA×V 反(fan)總(zong)÷（ε×d）×109]÷(V 樣×Cpr) ÷T=1608×ΔA÷Cpr

按(an)樣本鮮(xian)重(zhong)計算(suan)

單位(wei)定(ding)義(yi)：每(mei)g 組織(zhi)每(mei)分鐘(zhong)生(sheng)成 1 nmol NADH 定(ding)義(yi)為(wei)壹個酶活力(li)單位(wei)。

G6P（nmol/min/g 鮮(xian)重(zhong)）＝[ΔA×V 反總(zong)÷（ε×d）×109]÷(W ×V 樣÷V 樣(yang)總(zong))÷T=1608×ΔA÷W

按(an)細菌(jun)或(huo)細胞(bao)密(mi)度(du)計(ji)算(suan)：

單位(wei)定(ding)義(yi)：每(mei) 1 萬(wan)個(ge)細菌(jun)或(huo)細胞(bao)每分鐘(zhong)生(sheng)成 1 nmol NADH 定(ding)義(yi)為(wei)壹個酶活力(li)單位(wei)。

G6P（nmol/min/104 cell）＝[ΔA×V 反(fan)總(zong)÷（ε×d）×109]÷(500×V 樣÷V 樣(yang)總(zong))÷T=3.215×ΔA

V 反(fan)總(zong)：反應(ying)體(ti)系(xi)總(zong)體(ti)積，1×10-3 L；ε：NADH 摩(mo)爾(er)消光系(xi)數，6.22×103 L / mol /cm；d：比(bi)色皿光徑(jing)，1cm； V 樣(yang)：加(jia)入(ru)樣(yang)本體(ti)積，0.05 ml；V 樣(yang)總(zong)：加(jia)入(ru)提(ti)取(qu)液(ye)體(ti)積，1 ml；T：反(fan)應時間(jian)，2 min；Cpr：樣(yang)本(ben)蛋(dan)白(bai)質濃度(du)，mg/ml；W：樣(yang)本(ben)質量，g；500：細菌(jun)或(huo)細胞(bao)總(zong)數，500 萬(wan)。

用(yong) 96 孔(kong)板測定(ding)的(de)計(ji)算(suan)公(gong)式如(ru)下(xia)

1、血(xue)清(qing)（漿）G6P 活(huo)力計(ji)算(suan)

單位(wei)定(ding)義(yi)：每(mei)毫升血(xue)清(qing)（漿）每(mei)分鐘(zhong)生(sheng)成 1 nmol NADH 定(ding)義(yi)為(wei)壹個酶活力(li)單位(wei)。

G6P（nmol/min/ml））＝[ΔA×V 反(fan)總(zong)÷（ε×d）×109]÷V 樣÷T=3216×ΔA 2、組織(zhi)、細菌(jun)或(huo)細胞(bao)中(zhong) G6P 活(huo)力計(ji)算(suan)

按(an)樣本蛋(dan)白(bai)濃度(du)計(ji)算(suan)

單位(wei)定(ding)義(yi)：每(mei)mg 組織(zhi)蛋(dan)白(bai)每分鐘(zhong)生(sheng)成 1nmol NADH 定(ding)義(yi)為(wei)壹個酶活力(li)單位(wei)。

G6P（nmol/min/mg prot）＝[ΔA×V 反(fan)總(zong)÷（ε×d）×109]÷(V 樣×Cpr) ÷T=3216×ΔA÷Cpr

按(an)樣本鮮(xian)重(zhong)計算(suan)

單位(wei)定(ding)義(yi)：每(mei)g 組織(zhi)每(mei)分鐘(zhong)生(sheng)成 1 nmol NADH 定(ding)義(yi)為(wei)壹個酶活力(li)單位(wei)。

G6P（nmol/min/g 鮮(xian)重(zhong)）＝[ΔA×V 反總(zong)÷（ε×d）×109]÷(W ×V 樣÷V 樣(yang)總(zong))÷T=3216×ΔA÷W

按(an)細菌(jun)或(huo)細胞(bao)密(mi)度(du)計(ji)算(suan)：

單位(wei)定(ding)義(yi)：每(mei) 1 萬(wan)個(ge)細胞(bao)或細胞(bao)每分鐘(zhong)生(sheng)成 1 nmol NADH 定(ding)義(yi)為(wei)壹個酶活力(li)單位(wei)。

G6P（nmol/min/104 cell）＝[ΔA×V 反(fan)總(zong)÷（ε×d）×109]÷(500×V 樣÷V 樣(yang)總(zong))÷T=6.43×ΔA

V 反(fan)總(zong)：反應(ying)體(ti)系(xi)總(zong)體(ti)積，2×10-4 L；ε：NADH 摩(mo)爾(er)消光系(xi)數，6.22×103 L / mol /cm；d：96 孔(kong)板光徑(jing)，0.5cm； V 樣(yang)：加(jia)入(ru)樣(yang)本體(ti)積，0.01 ml；V 樣(yang)總(zong)：加(jia)入(ru)提(ti)取(qu)液(ye)體(ti)積，1 ml；T：反(fan)應(ying)時間(jian)，2 min；Cpr：樣(yang)本(ben)蛋(dan)白(bai)質濃度(du)，mg/ml；W：樣(yang)本(ben)質量，g；500：細菌(jun)或(huo)細胞(bao)總(zong)數，500 萬(wan)。

葡萄(tao)糖-6-磷酸酶G6P試(shi)劑(ji)盒 糖異(yi)生(sheng)系列(lie)