ACL 在ATP 和輔meiA 存(cun)在的情況下(xia)催(cui)化(hua)檸(ning)檬酸(suan)裂(lie)解為(wei)乙(yi)酰輔(fu)meiA、草(cao)酰乙(yi)酸(suan)、腺苷(gan)二(er)磷(lin)酸(suan)和(he)磷酸(suan)鹽(yan)。蘋果(guo)酸(suan)脫(tuo)氫(qing)酶進壹步催化(hua)草(cao)酰乙(yi)酸(suan)和(he)NADH 生(sheng)成(cheng)蘋果(guo)酸(suan)和(he)NAD+，在 340nm 測定NADH 減(jian)少速率(lv)，計(ji)算 ACL 活性(xing)。
ATP-檸(ning)檬酸(suan)裂(lie)解酶試劑(ji)盒(he) 脂(zhi)肪酸(suan)系列

ATP-檸(ning)檬酸(suan)裂(lie)解酶（ATP-citrate lyase，ACL）試劑盒(he)說(shuo)明(ming)書

微量法(fa) 100 管/96 樣

ATP-檸(ning)檬酸(suan)裂(lie)解酶試劑(ji)盒(he) 脂(zhi)肪酸(suan)系列

正(zheng)式測定前務(wu)必取 2-3 個預期(qi)差(cha)異較大(da)的樣(yang)本(ben)做(zuo)預測定測定意(yi)義：

ACL（EC4.1.3.8）是脂肪酸(suan)合成(cheng)中(zhong)的關(guan)鍵(jian)酶，其催(cui)化(hua)產(chan)生(sheng)的乙(yi)酰輔(fu)meiA 可用於脂(zhi)肪酸(suan)合成(cheng)和(he)碳(tan)鏈(lian)延(yan)長、黃(huang)酮(tong)類物(wu)質(zhi)合成(cheng)、氨(an)基(ji)酸(suan)合成(cheng)等(deng)。

測定原(yuan)理：

ACL 在ATP 和輔meiA 存(cun)在的情況下(xia)催(cui)化(hua)檸(ning)檬酸(suan)裂(lie)解為(wei)乙(yi)酰輔(fu)meiA、草(cao)酰乙(yi)酸(suan)、腺苷(gan)二(er)磷(lin)酸(suan)和(he)磷酸(suan)鹽(yan)。蘋果(guo)酸(suan)脫(tuo)氫(qing)酶進壹步催化(hua)草(cao)酰乙(yi)酸(suan)和(he)NADH 生(sheng)成(cheng)蘋果(guo)酸(suan)和(he)NAD⁺，在 340nm 測定NADH 減(jian)少速率(lv)，計(ji)算 ACL 活性(xing)。

組成(cheng)：

自(zi)備儀器(qi)和(he)用(yong)品(pin)：

紫(zi)外(wai)分(fen)光(guang)光(guang)度計(ji)/酶標儀、臺式離心(xin)機(ji)、水(shui)浴(yu)鍋(guo)、移(yi)液(ye)器(qi)、微(wei)量(liang)石(shi)英(ying)比色(se)皿/96 孔(kong)板(ban)、研(yan)缽、冰和(he)蒸(zheng)餾(liu)水(shui)

樣本的前處(chu)理：

1、細菌或培(pei)養(yang)細胞：先收(shou)集細菌(jun)或(huo)細(xi)胞到(dao)離心(xin)管(guan)內(nei)，離心(xin)後(hou)棄上(shang)清；按照(zhao)細菌(jun)或(huo)細胞數(shu)量(liang)（104 個）：提(ti)取(qu)液(ye)體(ti)積(ji)（ml）為 500~1000：1 的比例(li)（建議 500 萬細(xi)菌(jun)或細胞(bao)加(jia)入(ru) 1ml 提(ti)取(qu)液(ye)），超(chao)聲(sheng)波破碎細(xi)菌或細胞(bao)（冰浴(yu)，功(gong)率(lv) 20％或 200W，超(chao)聲(sheng) 3s，間隔 10s，重(zhong)復 30 次(ci)）；8000g 4℃離心(xin) 10min，取(qu)上(shang)清，置(zhi)冰上(shang)待測。

2、組織：按照(zhao)組織質(zhi)量（g）：提(ti)取(qu)液(ye)體(ti)積(ji)(ml)為 1：5~10 的比例(li)（建議稱(cheng)取(qu)約(yue) 0.1g 組織，加(jia)入(ru) 1ml 提(ti)取(qu)液(ye)），進行冰浴(yu)勻(yun)漿(jiang)。8000g 4℃離心(xin) 10min，取(qu)上(shang)清，置(zhi)冰上(shang)待測。

3、血(xue)清（漿(jiang)）樣品：直(zhi)接(jie)檢測。

測定步(bu)驟：

1、分光光度計(ji)或(huo)酶標儀預熱(re) 30min 以上(shang)，調節波(bo)長至(zhi) 340nm，蒸(zheng)餾(liu)水(shui)調零。

2、樣本測定

工(gong)作液(ye)的配置(zhi)，將試(shi)劑二(er)和(he)試(shi)劑三(san)轉移(yi)至(zhi)試(shi)劑壹中(zhong)，充(chong)分混(hun)合溶(rong)解，置(zhi)於 37℃（哺(bu)乳(ru)動物(wu)）或(huo) 25℃

（其它(ta)物(wu)種(zhong)）水(shui)浴(yu) 5min；（註意(yi)：可取少量試(shi)劑(ji)壹至(zhi)試(shi)劑二(er)和(he)試(shi)劑三(san)中(zhong)，充(chong)分混(hun)勻(yun)溶(rong)解後(hou)轉(zhuan)移(yi)至(zhi)試(shi)劑壹瓶(ping)中(zhong)，重(zhong)復 2-3 遍(bian)）；用(yong)不完(wan)的試(shi)劑(ji)分裝(zhuang)後-20℃保(bao)存(cun)，禁止(zhi)反復凍融(rong)。

在微量石(shi)英(ying)比色(se)皿或(huo) 96 孔(kong)板(ban)中(zhong)加(jia)入(ru) 10μl 樣(yang)本和 190μl 工(gong)作液(ye)，混(hun)勻(yun)，立即(ji)記(ji)錄(lu) 340nm 處(chu) 20s 時的吸光值(zhi)A1 和(he) 2min20s 後的吸光值(zhi)A2，計(ji)算ΔA=A1-A2。

ACL 活性(xing)計(ji)算：

用微量石(shi)英(ying)比色(se)皿測定的計(ji)算公(gong)式(shi)如(ru)下(xia)

1、血(xue)清（漿(jiang)）ACL 活力(li)計(ji)算

單位定義：每毫(hao)升血(xue)清（漿(jiang)）每分鐘(zhong)消(xiao)耗(hao) 1 nmol NADH 定義為壹個酶活力(li)單位。

ACL（nmol/min/ml）＝[ΔA×V 反總(zong)÷（ε×d）×109]÷V 樣(yang)÷T=1608×ΔA 2、組織、細(xi)菌或細胞(bao)中(zhong) ACL 活(huo)力(li)計(ji)算

按樣本(ben)蛋白濃度計(ji)算

單位定義：每mg 組織蛋白每分(fen)鐘(zhong)消(xiao)耗(hao) 1nmol NADH 定義為壹個酶活力(li)單位。

ACL（nmol/min/mg prot）＝[ΔA×V 反總(zong)÷（ε×d）×109]÷(V 樣(yang)×Cpr) ÷T=1608×ΔA÷Cpr

按樣本(ben)鮮重(zhong)計(ji)算

單位定義：每g 組織每(mei)分鐘(zhong)消(xiao)耗(hao) 1 nmol NADH 定義為壹個酶活力(li)單位。

ACL（nmol/min/g 鮮重(zhong)）＝[ΔA×V 反總(zong)÷（ε×d）×109]÷(W ×V 樣(yang)÷V 樣(yang)總(zong))÷T=1608×ΔA÷W

按細菌(jun)或細(xi)胞(bao)密(mi)度計(ji)算：

單位定義：每 1 萬個(ge)細(xi)胞每分(fen)鐘(zhong)消(xiao)耗(hao) 1 nmol NADH 定義為壹個酶活力(li)單位。

ACL（nmol/min/104 cell）＝[ΔA×V 反總(zong)÷（ε×d）×109]÷(500×V 樣(yang)÷V 樣(yang)總(zong))÷T=3.216×ΔA

V 反總(zong)：反應體系總體積，2×10-4 L；ε：NADH 摩爾(er)消(xiao)光(guang)系數(shu)，6.22×103 L / mol /cm；d：比色(se)皿光(guang)徑(jing)，1cm； V 樣：加(jia)入(ru)樣(yang)本體積(ji)，0.01 ml；V 樣(yang)總：加入(ru)提(ti)取(qu)液(ye)體(ti)積(ji)，1 ml；T：反應時間，2 min；Cpr：樣本(ben)蛋白質(zhi)濃度，mg/ml；W：樣本(ben)質(zhi)量，g；500：細菌或細(xi)胞總(zong)數(shu)，500 萬。

用 96 孔(kong)板(ban)測定的計(ji)算公(gong)式(shi)如(ru)下(xia)

1、血(xue)清（漿(jiang)）ACL 活力(li)計(ji)算

單位定義：每毫(hao)升血(xue)清（漿(jiang)）每分鐘(zhong)消(xiao)耗(hao) 1 nmol NADH 定義為壹個酶活力(li)單位。

ACL（nmol/min/ml）＝[ΔA×V 反總(zong)÷（ε×d）×109]÷V 樣(yang)÷T=3216×ΔA 2、組織、細(xi)菌或細胞(bao)中(zhong) ACL 活(huo)力(li)計(ji)算

按樣本(ben)蛋白濃度計(ji)算

單位定義：每mg 組織蛋白每分(fen)鐘(zhong)消(xiao)耗(hao) 1nmol NADH 定義為壹個酶活力(li)單位。

ACL（nmol/min/mg prot）＝[ΔA×V 反總(zong)÷（ε×d）×109]÷(V 樣(yang)×Cpr) ÷T=3216×ΔA÷Cpr

按樣本(ben)鮮重(zhong)計(ji)算

單位定義：每g 組織每(mei)分鐘(zhong)消(xiao)耗(hao) 1 nmol NADH 定義為壹個酶活力(li)單位。

ACL（nmol/min/g 鮮重(zhong)）＝[ΔA×V 反總(zong)÷（ε×d）×109]÷(W× V 樣(yang)÷V 樣(yang)總(zong))÷T=3216×ΔA÷W

按細菌(jun)或細(xi)胞(bao)密(mi)度計(ji)算：

單位定義：每 1 萬個(ge)細(xi)胞每分(fen)鐘(zhong)消(xiao)耗(hao) 1 nmol NADH 定義為壹個酶活力(li)單位。

ACL（nmol/min/104 cell）＝[ΔA×V 反總(zong)÷（ε×d）×109]÷(500×V 樣(yang)÷V 樣(yang)總(zong))÷T=6.432×ΔA

V 反總(zong)：反應體系總體積，2×10-4 L；ε：NADH 摩爾(er)消(xiao)光(guang)系數(shu)，6.22×103 L / mol /cm；d：96 孔(kong)板(ban)光(guang)徑，0.5cm； V 樣：加(jia)入(ru)樣(yang)本體積(ji)，0.01 ml；V 樣(yang)總：加入(ru)提(ti)取(qu)液(ye)體(ti)積(ji)，1 ml；T：反應時間，2 min；Cpr：樣本(ben)蛋白質(zhi)濃度，mg/ml；W：樣本(ben)質(zhi)量，g；500：細菌或細(xi)胞總(zong)數(shu)，500 萬。

ATP-檸(ning)檬酸(suan)裂(lie)解酶試劑(ji)盒(he) 脂(zhi)肪酸(suan)系列