遊(you)離脂肪(fang)酸(suan)，也(ye)稱為(wei)非(fei)酯(zhi)化脂肪(fang)酸(suan)，在(zai)與(yu)白(bai)蛋白(bai)結合(he)的血漿(jiang)中(zhong)循環(huan)。動物血液(ye)中(zhong)的遊(you)離脂肪(fang)酸(suan) (FFA )含(han)量(liang)是(shi)壹(yi)項(xiang)重(zhong)要的生理生(sheng)化(hua)指標(biao)。血清(qing)中(zhong)遊(you)離脂肪(fang)酸(suan)的濃(nong)度(du)與脂類代謝、糖代(dai)謝、內(nei)分(fen)泌(mi)功能(neng)有關，遊(you)離脂肪(fang)酸(suan)的濃(nong)度(du)會因為(wei)糖(tang)尿(niao)病、重癥(zheng)肝障礙(ai)、甲(jia)狀腺功能(neng)亢進等(deng)疾病而上升。
遊(you)離脂肪(fang)酸(suan)FFA含(han)量(liang)試(shi)劑盒

遊(you)離脂肪(fang)酸(suan)（FFA）含(han)量(liang)試(shi)劑盒（測(ce)血清(qing)、動物組織(zhi)、微(wei)生(sheng)物、細(xi)胞）

微量(liang)法 100 管(guan)/96 樣

遊(you)離脂肪(fang)酸(suan)FFA含(han)量(liang)試(shi)劑盒

正(zheng)式測(ce)定(ding)前務必(bi)取(qu) 2-3 個預(yu)期(qi)差(cha)異(yi)較(jiao)大(da)的樣本(ben)做(zuo)預測(ce)定(ding)測定(ding)意義：

遊(you)離脂肪(fang)酸(suan)，也(ye)稱為(wei)非(fei)酯(zhi)化脂肪(fang)酸(suan)，在(zai)與(yu)白(bai)蛋白(bai)結合(he)的血漿(jiang)中(zhong)循環(huan)。動物血液(ye)中(zhong)的遊(you)離脂肪(fang)酸(suan) (FFA )含(han)量(liang)是(shi)壹(yi)項(xiang)重(zhong)要的生理生(sheng)化(hua)指標(biao)。血清(qing)中(zhong)遊(you)離脂肪(fang)酸(suan)的濃(nong)度(du)與脂類代謝、糖代(dai)謝、內(nei)分(fen)泌(mi)功能(neng)有關，遊(you)離脂肪(fang)酸(suan)的濃(nong)度(du)會因為(wei)糖(tang)尿(niao)病、重癥(zheng)肝障礙(ai)、甲(jia)狀腺功能(neng)亢進等(deng)疾病而上升。

測定(ding)原理：

用(yong)有機溶劑萃取(qu) FFA。含有 FFA 的有機液(ye)與三(san)乙(yi)醇(chun)胺(an)銅(tong)反(fan)應,在有機相(xiang)中(zhong)形成(cheng)脂肪(fang)酸(suan)銅(tong) (銅(tong)皂(zao)) FFA 壹 Cu。Cu 離子與顯(xian)色(se)液(ye)反應(ying)形成(cheng)紫紅色絡合(he)物。反應(ying)形成(cheng)的顏(yan)色深淺與(yu) Cu 離子濃(nong)度(du)的關系(xi)符(fu)合(he)朗伯壹比(bi)爾(er)定(ding)律，因此(ci)可利(li)用(yong)此(ci)反(fan)應(ying)進行(xing)比(bi)色(se)。

組成(cheng)：

自(zi)備(bei)儀(yi)器和(he)用(yong)品(pin)：

酶標(biao)儀(yi)、離心機、可調式移(yi)液(ye)器、96 孔(kong)板、蒸(zheng)餾水。

樣本(ben)前處(chu)理：

動物組織(zhi)：按照動物組織(zhi)質(zhi)量(liang)（g）：萃(cui)取(qu)液(ye)ml)為(wei) 1：5~10 的比(bi)例(li)（建(jian)議(yi)稱取約 0.1g 組織(zhi)，加(jia)入(ru) 1ml萃(cui)取液(ye)），進行(xing)冰浴勻漿。震蕩(dang)提(ti)取 15min，5000 rpm 4℃離心 5min，取有機相(xiang)待(dai)測(ce)。

血清(qing)：吸取 50 μl 血(xue)清(qing)樣(yang)本(ben)，加(jia)入(ru) 1 ml 萃(cui)取液(ye)，震蕩(dang)提(ti)取 15 min 後(hou)，4℃，5000 rpm 離心 5 min，取有機相(xiang)待(dai)測(ce)。

微生(sheng)物、細(xi)胞：按照細(xi)胞數量(liang)（104 個）：萃(cui)取液(ye)體積(ji)（ml）為(wei) 500~1000：1 的比(bi)例(li)（建(jian)議(yi) 500 萬(wan)細(xi)胞加入(ru) 1 ml 萃(cui)取液(ye)）加入(ru)萃(cui)取液(ye)，冰浴(yu)超聲(sheng)波(bo)破(po)碎(sui)細(xi)胞（功率(lv) 300w，超聲(sheng) 2 秒(miao)，間(jian)隔 3 秒(miao)，總(zong)時(shi)間(jian) 3min）；震蕩(dang)提(ti)取 15 min，然(ran)後(hou) 5000 rpm 4℃離心 5min，取有機相(xiang)待(dai)測(ce)。

註意(yi)：有機相(xiang)待(dai)測(ce)液(ye)可能(neng)存在(zai)於上層，也(ye)可能(neng)存在(zai)於下層，註意(yi)觀察，體積(ji)較(jiao)多的那壹層即為(wei)有機相(xiang)待(dai)測(ce)液(ye)。

測定(ding)步(bu)驟：

1、酶標(biao)儀(yi)預熱(re) 30min 以上，調節波(bo)長至 550 nm。

2、工(gong)作(zuo)液(ye)的配制(zhi)：臨(lin)用(yong)前根(gen)據用(yong)量(liang)按照試(shi)劑壹（V）：試(shi)劑二（V）：試(shi)劑三（m）=1（ml）：1（ml）：0.66（g）的比(bi)例(li)充(chong)分(fen)混(hun)勻。（註意(yi)：現(xian)用(yong)現(xian)配(pei)，用(yong)多(duo)少(shao)配多(duo)少(shao)，在空瓶(ping)中(zhong)配制(zhi)，試(shi)劑盒中(zhong)帶有 4 個空(kong)瓶(ping)，先(xian)將(jiang)試(shi)劑壹與(yu)試(shi)劑二混(hun)合(he)，最(zui)後(hou)再加(jia)入(ru)試(shi)劑三粉(fen)劑）

3、測定(ding)管(guan)：吸取600μl樣(yang)本(ben)，加(jia)入(ru)200μl工(gong)作(zuo)液(ye)，蓋緊(jin)後(hou)震蕩(dang)20 min，4℃，5000 rpm離心5 min，分(fen)層後(hou)取(qu)200μl上層有機相(xiang)，加(jia)入(ru)100μl試(shi)劑四(si)，搖(yao)勻，10 min後(hou)測(ce)定(ding)550 nm的吸光(guang)值，記(ji)為(wei)A測(ce)定(ding)。

4、空白(bai)管(guan)：吸取600μl萃(cui)取液(ye)，加入(ru)200μl工(gong)作(zuo)液(ye)，蓋緊(jin)後(hou)震蕩(dang)20 min，4℃，5000 rpm離心5 min，分(fen)層後(hou)取(qu)200μl上層有機相(xiang)，加(jia)入(ru)100μl試(shi)劑四(si)，搖(yao)勻，10 min後(hou)測(ce)定(ding)550 nm的吸光(guang)值，記(ji)為(wei)A空(kong)白(bai)。

空白(bai)管(guan)只需(xu)測(ce)壹(yi)次。△A=A測(ce)定(ding)-A空白(bai)

註意(yi)：1、有機溶劑易(yi)揮(hui)發，加(jia)入(ru)96孔(kong)板後(hou)應(ying)盡快檢測(ce)。

2、測定(ding)管(guan)中(zhong)加入(ru)的樣本(ben)即樣本(ben)前處(chu)理中(zhong)的有機相(xiang)待(dai)測(ce)液(ye)。

FFA 含量(liang)計(ji)算：

標(biao)準(zhun)曲線：y = 0.0161x - 0.0141   R2 = 0.9985    x：棕(zong)櫚(lv)酸(suan)標(biao)準(zhun)品濃(nong)度(du)（nmol/ml）

y：吸光(guang)值差值△A

1、血清(qing)FFA 含(han)量(liang)計(ji)算：

FFA 含量(liang)(μmol/ml)=(△A+0.0141)÷0.0161×V1÷(V3×V1÷V2)÷1000

=1.242×(△A+0.0141)

2、動物組織(zhi)、微(wei)生(sheng)物、細(xi)胞中(zhong) FFA 含量(liang)計(ji)算：

按樣本(ben)蛋白(bai)濃(nong)度(du)計(ji)算

FFA 含量(liang)(μmol/g 鮮(xian)重(zhong))=(△A+0.0141)÷0.0161×V1÷（W× V1÷V2）÷1000

=0.062×(△A+0.0141)÷W

按樣本(ben)蛋白(bai)濃(nong)度(du)計(ji)算

FFA 含量(liang)(μmo/mg prot)= (△A+0.0141)÷0.0161×V1÷(V1×Cpr)÷1000

=0.062×(△A+0.0141)÷Cpr

V1：加入(ru)樣(yang)本(ben)體積(ji)，0.6ml；V2：萃(cui)取(qu)液(ye)體積(ji)，1ml；V3：加(jia)入(ru)血(xue)清(qing)（漿(jiang)）體積(ji)，0.05 ml；Cpr：樣(yang)本(ben)蛋白(bai)質濃(nong)度(du)，mg/ml；W：動物組織(zhi)樣(yang)品(pin)質(zhi)量(liang)，g； 1000：1 μmol=1000 nmol 。

註意(yi)事(shi)項：

蛋白(bai)含量(liang)不(bu)可直接(jie)用(yong)萃(cui)取(qu)液(ye)提(ti)取的有機相(xiang)待(dai)測(ce)液(ye)直接(jie)測(ce)定(ding)，可用(yong)蒸(zheng)餾水或(huo)緩沖(chong)液(ye)或生(sheng)理鹽水選用(yong)本(ben)公(gong)司的BCA 法蛋白(bai)含量(liang)測(ce)定(ding)試(shi)劑盒。

最(zui)di檢(jian)出(chu)限(xian)為(wei) 20 nmol/ml。

遊(you)離脂肪(fang)酸(suan)FFA含(han)量(liang)試(shi)劑盒