FAS 是脂肪(fang)酸(suan)合成(cheng)關(guan)鍵(jian)酶，催化(hua)乙酰輔meiA 和(he)丙二(er)酰輔meiA 而(er)生(sheng)成(cheng)長鏈(lian)脂(zhi)肪酸(suan)。FAS 普遍(bian)表(biao)達於各種(zhong)組(zu)織(zhi)細胞(bao)中，在哺乳(ru)動物(wu)肝(gan)、腎(shen)、腦、肺(fei)和(he)乳(ru)腺(xian)以(yi)及(ji)脂肪組(zu)織(zhi)中表(biao)達豐(feng)富(fu)。
脂(zhi)肪酸合成(cheng)酶FAS活(huo)性(xing)試劑(ji)盒

脂(zhi)肪(fang)酸合成(cheng)酶（FAS）活(huo)性(xing)試劑(ji)盒說明(ming)書(shu)

微(wei)量法(fa) 100T/96S

脂(zhi)肪(fang)酸合成(cheng)酶FAS活(huo)性(xing)試劑(ji)盒

正(zheng)式測定(ding)前(qian)務(wu)必(bi)取 2-3 個(ge)預(yu)期(qi)差(cha)異較大(da)的樣本(ben)做(zuo)預(yu)測定(ding)測定(ding)意義：

FAS 是(shi)脂(zhi)肪酸(suan)合成(cheng)關(guan)鍵(jian)酶，催化(hua)乙酰輔meiA 和(he)丙二(er)酰輔meiA 而(er)生(sheng)成(cheng)長鏈(lian)脂(zhi)肪酸(suan)。FAS 普遍(bian)表(biao)達於各種(zhong)組(zu)織(zhi)細胞(bao)中，在哺乳(ru)動物(wu)肝(gan)、腎(shen)、腦、肺(fei)和(he)乳(ru)腺(xian)以(yi)及(ji)脂肪組(zu)織(zhi)中表(biao)達豐(feng)富(fu)。

測定(ding)原理(li)：

FAS 催化(hua)乙酰CoA、丙二(er)酰 CoA 和(he)NADPH 生(sheng)成(cheng)長鏈(lian)脂(zhi)肪酸(suan)和(he)NADP⁺；NADPH 在(zai) 340nm 有(you)吸收(shou)峰，而(er)NADP⁺沒(mei)有；通(tong)過測定(ding) 340nm 光吸收下降速率(lv)，計(ji)算(suan) FAS 活性。

組(zu)成(cheng)：

試劑(ji)壹：液體 100ml×1 瓶(ping)，－20℃保(bao)存。用前(qian) 1d 取出(chu)置(zhi)於 4℃充(chong)分(fen)解(jie)凍後(hou)混(hun)勻。

試劑(ji)二(er)：粉劑(ji)×1 瓶(ping)。臨(lin)用前(qian)加入(ru) 440μl 試劑(ji)四(si)，充(chong)分(fen)溶(rong)解(jie)，用不完(wan)的試劑(ji)分(fen)裝後(hou)-20℃保存，禁(jin)止反(fan)復凍融。

試劑(ji)三：粉劑(ji)×1 瓶(ping)，4℃保存(cun)。臨(lin)用前(qian)加入(ru) 440μl 試劑(ji)四(si)，充(chong)分(fen)溶(rong)解(jie)，用不完(wan)的試劑(ji)分(fen)裝後(hou)-20℃保存，禁(jin)止反(fan)復凍融。

試劑(ji)五：粉劑(ji)×1 瓶(ping)，4℃保存(cun)。臨(lin)用前(qian)加入(ru) 840μl 試劑(ji)四(si)，充(chong)分(fen)溶(rong)解(jie)，用不完(wan)的試劑(ji)分(fen)裝後(hou)-20℃保存，禁(jin)止反(fan)復凍融。

自(zi)備儀(yi)器(qi)和(he)用品：

研(yan)缽、冰(bing)、臺(tai)式離(li)心機(ji)、紫外(wai)分(fen)光(guang)光(guang)度(du)計(ji)/酶標(biao)儀(yi)、微(wei)量石英比(bi)色(se)皿(min)/96 孔(kong)板、可調(tiao)式移(yi)液槍(qiang)和蒸(zheng)餾(liu)水(shui)。

粗酶液提取：

組(zu)織(zhi)：按(an)照(zhao)組(zu)織(zhi)質(zhi)量(liang)（g）：試劑(ji)壹體積(ml)為 1：5~10 的比(bi)例(li)（建(jian)議稱(cheng)取約 0.1g 組(zu)織(zhi)，加入(ru) 1ml 試劑(ji)壹）進(jin)行(xing)冰(bing)浴勻漿(jiang)。12000g，4℃離心 40min，取上清置(zhi)冰(bing)上待(dai)測。

細(xi)菌(jun)、真菌(jun)：按(an)照(zhao)細(xi)胞數量（104 個(ge)）：試劑(ji)壹體積（ml）為 500~1000：1 的比(bi)例(li)（建(jian)議 500 萬(wan)細胞(bao)加入(ru) 1ml 試劑(ji)壹），冰浴超(chao)聲(sheng)波破(po)碎細(xi)胞（功率 300w，超(chao)聲(sheng) 3 秒，間隔 7 秒，總時間 3min）；然(ran)後(hou) 12000g， 4℃，離心 40min，取上清置(zhi)於冰上待(dai)測。

血(xue)清等液體：直接(jie)測定(ding)。

FAS 測定(ding)操作：

分(fen)光(guang)光(guang)度(du)計(ji)/酶標(biao)儀(yi)預(yu)熱(re) 30min，調(tiao)節(jie)波長到(dao) 340 nm，蒸(zheng)餾(liu)水(shui)調(tiao)零。

試劑(ji)四(si)置(zhi)於 40℃水(shui)浴中預熱(re) 30 min。

在(zai) 96 孔(kong)板或(huo) EP 管(guan)中(zhong)依次加入(ru) 20μl 上清液、4μl 試劑(ji)二(er)、4μl 試劑(ji)三、164μl 試劑(ji)四(si)和 8μl 試劑(ji)五，混(hun)勻後(hou)於 340nm 處(chu)測定(ding)吸光值，記錄(lu)第 30s 和(he) 90s 時吸光(guang)值，分(fen)別(bie)記(ji)錄(lu)為A1 和(he)A2。△A 測=A1-A2。

FAS 活(huo)性(xing)計算(suan)：

使(shi)用微(wei)量石英比(bi)色(se)皿(min)測定(ding)的計算(suan)公式如(ru)下

按(an)照(zhao)蛋(dan)白濃度(du)計(ji)算

活(huo)性(xing)單位定(ding)義：37℃中每毫克蛋(dan)白每分(fen)鐘(zhong)氧化(hua) 1nmol NADPH 為 1 個(ge)酶活(huo)單(dan)位。

FAS(nmol/min/mg prot) =(△A÷ε÷d×V 反(fan)總×109) ÷(Cpr×V 樣)÷T

=1608×△A÷Cpr

按(an)照(zhao)樣(yang)本質(zhi)量(liang)計(ji)算(suan)

活(huo)性(xing)單位定(ding)義：37℃中每克組(zu)織(zhi)每分(fen)鐘(zhong)氧化(hua) 1nmol NADPH 為 1 個(ge)酶活(huo)單(dan)位。

FAS(nmol/min/g 鮮(xian)重) = (△A÷ε÷d×V 反(fan)總×109) ÷(W×V 樣÷V 樣(yang)總)÷T

=1608×△A ÷W

按(an)細胞數量計算(suan)

活(huo)性(xing)單位定(ding)義：37℃中每 104 個(ge)細(xi)胞(bao)每(mei)分(fen)鐘(zhong)氧化(hua) 1nmol NADPH 為 1 個(ge)酶活(huo)單(dan)位。

FAS(nmol /min/104cell) = (△A÷ε÷d×V 反(fan)總×109) ÷(細胞(bao)數量×V 樣÷V 樣(yang)總)÷T

=1608×△A ÷細(xi)胞(bao)數量

按(an)液體體(ti)積計算

活(huo)性(xing)單位定(ding)義：37℃中每毫升(sheng)樣本每(mei)分(fen)鐘(zhong)氧化(hua) 1nmol NADPH 為 1 個(ge)酶活(huo)單(dan)位。

FAS(nmol /min/ml) =(△A÷ε÷d×V 反(fan)總×109) ÷V 樣÷T

=1608×△A

ε：NADPH 摩(mo)爾消(xiao)光(guang)系數，6.22×103L/mol/cm；d：比(bi)色(se)皿(min)光(guang)徑，1 cm；V 反(fan)總：反(fan)應體(ti)系總體積，200μl=2×10-4L； Cpr：上清液蛋(dan)白質(zhi)濃(nong)度(du)，mg/ml；W ：樣(yang)品質(zhi)量(liang)；V 樣(yang)：加入(ru)反(fan)應體(ti)系中上清液體積，20μl=0.02 ml；V樣總：提取液體積，1 ml；T：反(fan)應時間，1min。

使(shi)用 96 孔板測定(ding)的計算(suan)公式如(ru)下

按(an)照(zhao)蛋(dan)白濃度(du)計(ji)算

活(huo)性(xing)單位定(ding)義：37℃中每毫克蛋(dan)白每分(fen)鐘(zhong)氧化(hua) 1nmol NADPH 為 1 個(ge)酶活(huo)單(dan)位。

FAS(nmol/min/mg prot) =(△A÷ε÷d×V 反(fan)總×109)÷(Cpr×V 樣)÷T

=3216×△A÷Cpr

按(an)照(zhao)樣(yang)本質(zhi)量(liang)計(ji)算(suan)

活(huo)性(xing)單位定(ding)義：37℃中每克組(zu)織(zhi)每分(fen)鐘(zhong)氧化(hua) 1nmol NADPH 為 1 個(ge)酶活(huo)單(dan)位。

FAS(nmol/min/g 鮮(xian)重) = (△A÷ε÷d×V 反(fan)總×109) ÷(W×V 樣÷V 樣(yang)總)÷T

=3216×△A÷W

按(an)細胞數量計算(suan)

活(huo)性(xing)單位定(ding)義：37℃中每 104 個(ge)細(xi)胞(bao)每(mei)分(fen)鐘(zhong)氧化(hua) 1nmol NADPH 為 1 個(ge)酶活(huo)單(dan)位。

FAS(nmol /min/104cell) = (△A÷ε÷d×V 反(fan)總×109)÷(細胞(bao)數量×V 樣÷V 樣(yang)總)÷T

=3216×△A÷細(xi)胞(bao)數量

按(an)液體體(ti)積計算

活(huo)性(xing)單位定(ding)義：37℃中每毫升(sheng)樣本每(mei)分(fen)鐘(zhong)氧化(hua) 1nmol NADPH 為 1 個(ge)酶活(huo)單(dan)位。

FAS(nmol /min/ml) =(△A÷ε÷d×V 反(fan)總×109 )÷V 樣÷T

=3216×△A

ε：NADPH 摩(mo)爾消(xiao)光(guang)系數，6.22×103L/mol/cm；d：96 孔板光(guang)徑，0.5 cm；V 反(fan)總：反(fan)應體(ti)系總體積，

200μl=2×10-4L；Cpr：上清液蛋(dan)白質(zhi)濃(nong)度(du)，mg/ml；W ：樣(yang)品質(zhi)量(liang)；V 樣(yang)：加入(ru)反(fan)應體(ti)系中上清液體積，20μl=0.02 ml；V 樣總：提取液體積，1 ml；T：反(fan)應時間，1min。

脂(zhi)肪(fang)酸合成(cheng)酶FAS活(huo)性(xing)試劑(ji)盒