AAT 是(shi)壹個(ge)多(duo)功能(neng)蛋(dan)白(bai)大家族，主要(yao)負責催化生(sheng)物體內各(ge)種(zhong)酰(xian)基(ji)化和(he)去酰基(ji)化反(fan)應(ying)，在(zai)基(ji)因(yin)表(biao)達(da)、代(dai)謝(xie)和(he)信(xin)號傳導中具有重要(yao)作(zuo)用(yong)。
酰(xian)基(ji)轉(zhuan)移(yi)酶活(huo)性(xing)測(ce)定(ding)試劑盒(he) 脂肪(fang)酸(suan)系(xi)列

酰(xian)基(ji)轉(zhuan)移(yi)酶（alcohol acyl transferase，AAT）活(huo)性(xing)測(ce)定(ding)試劑盒(he)說(shuo)明書

微(wei)量法(fa) 100 管(guan)/96 樣(yang)

酰(xian)基(ji)轉(zhuan)移(yi)酶活(huo)性(xing)測(ce)定(ding)試劑盒(he) 脂肪(fang)酸(suan)系(xi)列

正(zheng)式測(ce)定(ding)前務必取(qu) 2-3 個(ge)預期差異較大(da)的(de)樣(yang)本(ben)做預測(ce)定(ding)測(ce)定(ding)意(yi)義(yi)：

AAT 是(shi)壹個(ge)多(duo)功能(neng)蛋(dan)白(bai)大家族，主要(yao)負責催化生(sheng)物體內各(ge)種(zhong)酰(xian)基(ji)化和(he)去酰基(ji)化反(fan)應(ying)，在(zai)基(ji)因(yin)表(biao)達(da)、代(dai)謝(xie)和(he)信(xin)號傳導中具有重要(yao)作(zuo)用(yong)。

測(ce)定(ding)原理(li)：

AAT 催(cui)化乙(yi)酰CoA 轉(zhuan)移(yi)乙酰(xian)基(ji)到(dao)丁醇(chun)，釋放(fang)的(de) CoA 還(hai)原DTNB 生(sheng)成(cheng)TNB；TNB 在(zai) 412nm 有(you)吸(xi)收峰(feng)，測(ce)定(ding) 412 nm 吸(xi)光度增(zeng)加速(su)率可計(ji)算 AAT 活(huo)性(xing)。

組(zu)成(cheng)：

自(zi)備(bei)儀(yi)器(qi)和(he)用(yong)品(pin)：

研(yan)缽、冰、臺式離心(xin)機(ji)、可見分光光度計(ji)/酶標(biao)儀(yi)、微(wei)量石(shi)英比色皿/96 孔(kong)板(ban)、恒(heng)溫水浴(yu)鍋(guo)、無水乙(yi)醇(chun)。

粗(cu)酶液提(ti)取(qu)：

組(zu)織(zhi)：按(an)照(zhao)組織(zhi)質量（g）：提(ti)取(qu)液體積(ml)為(wei) 1：5~10 的(de)比例(li)（建議稱取(qu)約 0.1g 組織(zhi)，加(jia)入 1ml 提(ti)取(qu)液）進(jin)行(xing)冰(bing)浴(yu)勻漿。8000g，4℃離(li)心(xin) 10min，取(qu)上(shang)清置(zhi)冰上(shang)待(dai)測(ce)。

細(xi)菌、真菌(jun)：按(an)照細(xi)胞(bao)數量(liang)（104 個）：提(ti)取(qu)液體積（ml）為(wei) 500~1000：1 的(de)比例(li)（建議 500 萬(wan)細(xi)胞(bao)加入 1ml 提(ti)取(qu)液），冰浴(yu)超(chao)聲(sheng)波(bo)破碎細(xi)胞(bao)（功率(lv) 300w，超(chao)聲(sheng) 3 秒(miao)，間(jian)隔(ge) 7 秒(miao)，總(zong)時(shi)間 3min）；然(ran)後 8000g，4℃，離(li)心(xin) 10min，取(qu)上(shang)清置(zhi)於(yu)冰上(shang)待(dai)測(ce)。

液體：直接檢(jian)測(ce)。

AAT 測(ce)定(ding)操作(zuo)：

1、分光光度計(ji)/酶標(biao)儀(yi)預熱(re) 30min，調(tiao)節(jie)波(bo)長到(dao) 412 nm，蒸餾水調(tiao)零。

2、工(gong)作(zuo)液的(de)配(pei)制：臨(lin)用(yong)前在(zai)試(shi)劑二瓶中加入 18ml 試(shi)劑壹，充(chong)分混勻待(dai)用(yong)。用不完(wan)的(de)試劑分裝後-20℃保(bao)存(cun)，禁止反(fan)復凍(dong)融(rong)。

3、試(shi)劑三(san)的(de)配(pei)制：臨(lin)用(yong)前加無水乙(yi)醇(chun) 1ml 充(chong)分溶(rong)解待(dai)用(yong)，用不完(wan)的(de)試劑 4℃保(bao)存(cun)。

4、 空(kong)白(bai)管(guan)：在(zai)Ep 管(guan)或 96 孔(kong)板(ban)中加入 10μL 提(ti)取(qu)液和 180μL 工(gong)作(zuo)液，充分混勻，35℃反應(ying) 15min，加入10μL 試(shi)劑三(san)，充分混勻，25℃靜置(zhi) 10min，測(ce)定(ding) 412nm 處吸(xi)光值(zhi)，記(ji)為 A 空(kong)白(bai)管(guan)。

5、 測(ce)定(ding)管(guan)：在(zai) Ep 管(guan)或 96 孔(kong)板(ban)中加入 10μL 樣(yang)本(ben)和 180μL 工(gong)作(zuo)液，充分混勻，35℃反應(ying) 15min，加入 10μL試(shi)劑三(san)，充分混勻，25℃靜置(zhi) 10min，測(ce)定(ding) 412nm 處吸(xi)光值(zhi)，記(ji)為A 測(ce)定(ding)管(guan)。△A=A 測(ce)定(ding)管(guan)- A 空白(bai)管(guan)，空白(bai)管(guan)只要(yao)做壹管(guan)。

AAT 活(huo)性(xing)計(ji)算：

使(shi)用微(wei)量石(shi)英比色皿測(ce)定(ding)的(de)計算公式(shi)如(ru)下(xia)

按(an)照蛋(dan)白(bai)濃度計(ji)算

活(huo)性(xing)單位(wei)定(ding)義：每(mei)毫克蛋(dan)白(bai)每(mei)分鐘(zhong)催化產(chan)生(sheng) 1nmol TNB 定(ding)義為(wei)壹個(ge)酶(mei)活(huo)單位(wei)。

AAT (nmol/min/mg prot) = △A ÷（×d）×V 反(fan)總(zong)÷（V 樣(yang)×Cpr）÷T = 98.04×△A÷Cpr

按(an)照樣(yang)本(ben)質量計算

活(huo)性(xing)單位(wei)定(ding)義：每(mei)克組織(zhi)每(mei)分鐘(zhong)催化產(chan)生(sheng) 1nmol TNB 定(ding)義為(wei)壹個(ge)酶(mei)活(huo)單位(wei)。

AAT (nmol/min /g 鮮(xian)重) = △A ÷（×d）×V 反總(zong)÷(W×V 樣(yang)÷V 樣(yang)總(zong)) ÷T

= 98.04×△A÷W

按(an)細(xi)胞(bao)數量(liang)計算

活(huo)性(xing)單位(wei)定(ding)義：每(mei) 104 個細(xi)胞(bao)每(mei)分鐘(zhong)催化產(chan)生(sheng) 1nmol TNB 定(ding)義為(wei)壹個(ge)酶(mei)活(huo)單位(wei)。

AAT (nmol/min/104cell) = △A ÷（×d）×V 反(fan)總(zong)÷(細(xi)胞(bao)數量(liang)×V 樣(yang)÷V 樣(yang)總(zong)) ÷T

= 98.04×△A÷ 細(xi)胞(bao)數量(liang)

按(an)液體體(ti)積計(ji)算

活(huo)性(xing)單位(wei)定(ding)義：每(mei)毫升樣(yang)品(pin)每(mei)分鐘(zhong)催化產(chan)生(sheng) 1nmol TNB 定(ding)義為(wei)壹個(ge)酶(mei)活(huo)單位(wei)。

AAT (nmol/min/ml) = △A ÷（×d）×V 反(fan)總(zong)÷V 樣(yang)÷T

= 98.04×△A

：TNB 消(xiao)光系數，13600L/mol/cm；d：比色皿光徑(jing)：1cm；V 反總(zong)：反(fan)應(ying)總(zong)體(ti)積，0.2ml；V 樣(yang)：加(jia)入反(fan) 應(ying)體系(xi)中上(shang)清液體積，0.01ml；V 樣(yang)總(zong)：加(jia)入提(ti)取(qu)液體積，1ml；Cpr：蛋(dan)白(bai)含(han)量(liang)，mg/ml；W：樣(yang)本(ben)質量， g；T：反應(ying)時間(jian)，15 min。

使(shi)用 96 孔(kong)板(ban)測(ce)定(ding)的(de)計算公式(shi)如(ru)下(xia)

按(an)照蛋(dan)白(bai)濃度計(ji)算

活(huo)性(xing)單位(wei)定(ding)義：每(mei)毫克蛋(dan)白(bai)每(mei)分鐘(zhong)催化產(chan)生(sheng) 1nmol TNB 定(ding)義為(wei)壹個(ge)酶(mei)活(huo)單位(wei)。

AAT (nmol/min/mg prot) = △A ÷（×d）×V 反(fan)總(zong)÷（V 樣(yang)×Cpr）÷T

=196.08×△A÷Cpr

按(an)照樣(yang)本(ben)質量計算

活(huo)性(xing)單位(wei)定(ding)義：每(mei)克組織(zhi)每(mei)分鐘(zhong)催化產(chan)生(sheng) 1nmol TNB 定(ding)義為(wei)壹個(ge)酶(mei)活(huo)單位(wei)。

AAT (nmol/min /g 鮮(xian)重) = △A ÷（×d）×V 反總(zong)÷(W×V 樣(yang)÷V 樣(yang)總(zong)) ÷T

= 196.08×△A÷W

按(an)細(xi)胞(bao)數量(liang)計算

活(huo)性(xing)單位(wei)定(ding)義：每(mei) 104 個細(xi)胞(bao)每(mei)分鐘(zhong)催化產(chan)生(sheng) 1nmol TNB 定(ding)義為(wei)壹個(ge)酶(mei)活(huo)單位(wei)。

AAT (nmol/min/104cell) = △A ÷（×d）×V 反(fan)總(zong)÷(細(xi)胞(bao)數量(liang)×V 樣(yang)÷V 樣(yang)總(zong)) ÷T

=196.08×△A÷ 細(xi)胞(bao)數量(liang)

按(an)液體體(ti)積計(ji)算

活(huo)性(xing)單位(wei)定(ding)義：每(mei)毫升樣(yang)品(pin)每(mei)分鐘(zhong)催化產(chan)生(sheng) 1nmol TNB 定(ding)義為(wei)壹個(ge)酶(mei)活(huo)單位(wei)。

AAT (nmol/min/ml) = △A ÷（×d）×V 反(fan)總(zong)÷V 樣(yang)÷T

= 196.08×△A

：TNB 消(xiao)光系數，13600L/mol/cm；d：96 孔(kong)板(ban)光(guang)徑(jing)：0.5cm；V 反總(zong)：反(fan)應(ying)總(zong)體(ti)積，0.2ml；V 樣(yang)：加(jia)入反(fan)應(ying)體系(xi)中上(shang)清液體積，0.01ml；V 樣(yang)總(zong)：加(jia)入提(ti)取(qu)液體積，1ml；Cpr：蛋(dan)白(bai)含(han)量(liang)，mg/ml；W：樣(yang)本(ben)質量，g；T：反應(ying)時間(jian)，15min。

酰(xian)基(ji)轉(zhuan)移(yi)酶活(huo)性(xing)測(ce)定(ding)試劑盒(he) 脂肪(fang)酸(suan)系(xi)列