LPS 又(you)稱甘油酯(zhi)水解(jie)酶，催化(hua)甘油三酯(zhi)水解(jie)生成脂肪酸和甘油（或(huo)者甘油二(er)酯和單酯(zhi)）。LPS 廣(guang)泛的(de)存在(zai)於各(ge)種生物(wu)中。血清(qing)中 LPS 的異(yi)常(chang)增高(gao)常(chang)見(jian)於(yu)胰(yi)腺(xian)炎(yan)和胰(yi)腺(xian)癌(ai)。
脂肪酶LPS活(huo)性試劑盒

脂肪酶（LPS）活(huo)性試劑盒說明(ming)書

微(wei)量法 100/96S

脂肪酶LPS活(huo)性試劑盒

正(zheng)式測定前(qian)務必(bi)取 2-3 個預期差(cha)異(yi)較(jiao)大的(de)樣本(ben)做(zuo)預測定測定意(yi)義(yi)：

LPS 又(you)稱甘油酯(zhi)水解(jie)酶，催化(hua)甘油三酯(zhi)水解(jie)生成脂肪酸和甘油（或(huo)者甘油二(er)酯和單酯(zhi)）。LPS 廣(guang)泛的(de)存在(zai)於各(ge)種生物(wu)中。血清(qing)中 LPS 的(de)異(yi)常(chang)增高(gao)常(chang)見(jian)於(yu)胰(yi)腺(xian)炎(yan)和胰(yi)腺(xian)癌(ai)。

測定原(yuan)理：

LPS 催化(hua)油酯水解(jie)成脂肪酸，利用銅皂(zao)法測定脂肪酸生成速率(lv)，即(ji)可計算 LPS 活(huo)性。

組成：

試(shi)劑(ji)二(er)：液(ye)體(ti) 10ml×1 瓶，4℃保存(cun)。每(mei)次使用前(qian)用震(zhen)蕩(dang)混(hun)勻(yun)器劇烈(lie)震蕩(dang) 20min。

標準品：液(ye)體(ti) 10 μl×1 瓶，10 µmol/ml 的標準溶液(ye)，4℃保存(cun)。臨(lin)用前(qian)加入(ru) 3.168 ml 甲(jia)苯(ben)，充分溶解(jie)。

自(zi)備(bei)儀(yi)器和用品：

研(yan)缽、臺式離心(xin)機、震(zhen)蕩(dang)混(hun)勻(yun)器、可見(jian)分光(guang)光(guang)度(du)計(ji)/酶標儀、微(wei)量石(shi)英(ying)比(bi)色皿(min)/96 孔(kong)板(ban)、可調式移(yi)液(ye)槍、甲(jia)苯(ben) 80ml、冰(bing)和蒸(zheng)餾(liu)水。

粗酶液(ye)提(ti)取(qu)：

組織(zhi)：按(an)照(zhao)組織(zhi)質(zhi)量（g）：試(shi)劑(ji)壹體積(ji)(ml)為(wei) 1：5~10 的(de)比(bi)例（建議(yi)稱(cheng)取約 0.1g 組織(zhi)，加(jia)入(ru) 1ml 試(shi)劑(ji)壹）進行(xing)冰浴(yu)勻(yun)漿(jiang)。12000g，4℃離心(xin) 10min，取上(shang)清(qing)置(zhi)冰上(shang)待測。

細(xi)菌(jun)、真菌(jun)：按(an)照(zhao)細(xi)胞(bao)數(shu)量(liang)（104 個）：試劑(ji)壹體積(ji)（ml）為(wei) 500~1000：1 的(de)比(bi)例（建議(yi) 500 萬(wan)細(xi)胞(bao)加入(ru) 1ml 試(shi)劑(ji)壹），冰(bing)浴(yu)超(chao)聲波破(po)碎細(xi)胞(bao)（功(gong)率(lv) 300w，超(chao)聲 3 秒(miao)，間隔(ge) 7 秒(miao)，總(zong)時(shi)間 3min）；然(ran)後(hou) 12000g， 4℃，離心(xin) 10min，取上(shang)清(qing)置(zhi)於冰(bing)上(shang)待測。

血(xue)清(qing)等液(ye)體(ti): 直(zhi)接(jie)檢(jian)測。

LPS 測定操(cao)作(zuo)：

分光(guang)光(guang)度(du)計(ji)/酶標儀預熱(re) 30 min，調節波(bo)長到 710 nm，蒸(zheng)餾(liu)水(shui)調零。

試(shi)劑(ji)壹和試(shi)劑(ji)二(er)置(zhi)於 37℃水(shui)浴(yu)預熱(re) 30min。

在(zai) 1.5ml EP 管中依(yi)次加(jia)入(ru)下列試(shi)劑

37℃振(zhen)蕩(dang)反應 10 min

37℃振(zhen)蕩(dang)反應 10 min 後(hou)，8000g，25℃，離心(xin) 10min，取(qu)上(shang)清(qing)液(ye)

37℃振(zhen)蕩(dang)反應 5 min 後，靜(jing)置(zhi) 5min，取 200μl 上(shang)層液(ye)加(jia)入(ru)微(wei)量石(shi)英(ying)比(bi)色皿(min)/96 孔(kong)板(ban)，於 710nm 處(chu)測定吸(xi)光值(zhi)。

註(zhu)意：空(kong)白(bai)管和標準管只(zhi)需(xu)測定壹次。

LPS 活(huo)性計算公式：

組織(zhi)、細(xi)菌(jun)或細(xi)胞(bao)LPS 活(huo)性

按(an)照(zhao)蛋(dan)白(bai)濃(nong)度(du)計(ji)算

活(huo)性單位(wei)定義(yi)：37℃中每(mei)毫(hao)克蛋(dan)白(bai)每(mei)分鐘水解(jie)橄欖(lan)油(you)生成 1μmol 脂肪酸為壹個酶活(huo)單位(wei)。

LPS (μmol/min/mg prot) = [C 標準品×(A 測定管-A 空白(bai)管)÷（A 標準- A 空白(bai)管）]×V 反總(zong)÷（Cpr×V 樣）

÷T

=16×[(A 測定管－A 空白(bai)管)÷（A 標準管- A 空白(bai)管）]÷Cpr

按(an)照(zhao)樣本(ben)質(zhi)量計(ji)算

活(huo)性單位(wei)定義(yi)：37℃中每(mei)克組織(zhi)每(mei)分鐘水解(jie)橄欖(lan)油(you)生成 1μmol 脂肪酸為壹個酶活(huo)單位(wei)。

LPS (μmol/min/g 鮮(xian)重) = [C 標準品×(A 測定管-A 空白(bai)管)÷（A 標準管- A 空白(bai)管）]×V 反總(zong)÷（W×V 樣÷V樣總(zong)）÷T

=16×[(A 測定管－A 空白(bai)管)÷（A 標準管- A 空白(bai)管）]÷W

按(an)照(zhao)細(xi)菌(jun)或者細(xi)胞(bao)數(shu)量(liang)計(ji)算

活(huo)性單位(wei)定義(yi)：37℃中每(mei) 104 個細(xi)胞(bao)每(mei)分鐘水解(jie)橄欖(lan)油(you)生成 1μmol 脂肪酸為壹個酶活(huo)單位(wei)。

LPS (μmol /min/104cell) = [C 標準品×(A 測定管-A 空白(bai)管)÷（A 標準管- A 空白(bai)管）]×V 反總(zong)÷（細(xi)胞(bao)數(shu)量(liang)×V樣÷V 樣總(zong)）÷T

=16×[(A 測定管－A 空白(bai)管)÷（A 標準管- A 空白(bai)管）]÷細(xi)胞(bao)數(shu)量(liang)

血(xue)清(qing)等液(ye)體(ti)LPS 活(huo)性

活(huo)性單位(wei)定義(yi)：37℃中每(mei)毫(hao)升血(xue)清(qing)每(mei)分鐘水解(jie)橄欖(lan)油(you)生成 1μmol 脂肪酸為壹個酶活(huo)單位(wei)。

LPS (μmol /min/ml) = [C 標準品×(A 測定管－A 空白(bai)管)÷（A 標準管- A 空白(bai)管）]×V 反總(zong)÷V 樣÷T

=16×[(A 測定管－A 空白(bai)管)÷（A 標準管- A 空白(bai)管）]

C 標準品：10 µmol/ml；V 反總(zong)：反應總(zong)體(ti)積，0.8ml；V 樣：反應中加入(ru)樣本(ben)體積(ji)，0.05ml；V 樣總(zong)：加(jia)入(ru)提(ti)取(qu)液(ye)體(ti)積(ji)，1ml；Cpr：上(shang)清(qing)液(ye)蛋(dan)白(bai)質(zhi)濃(nong)度(du)，mg/ml，需(xu)要另外(wai)測定，建議(yi)使用本(ben)公司(si)BCA 蛋(dan)白(bai)質(zhi)含量(liang)測定試(shi)劑盒(he)；W：樣本(ben)質(zhi)量，g；T：催化(hua)反應時間，10 min。

脂肪酶LPS活(huo)性試劑盒