LOX 催(cui)化(hua)亞you酸(suan)氧(yang)化(hua)，氧(yang)化(hua)產物在 280nm 處有特征吸(xi)收(shou)峰(feng)；測(ce)定(ding) 280nm 吸(xi)光(guang)度增加速率，來(lai)計算(suan) LOX活(huo)性(xing)。
脂氧(yang)合(he)酶LOX活(huo)性(xing)測(ce)定(ding)試(shi)劑盒 脂肪(fang)酸系列

脂氧(yang)合(he)酶（LOX）活(huo)性(xing)測(ce)定(ding)試(shi)劑盒說(shuo)明書(shu)

微量法 100T/48S

脂氧(yang)合(he)酶LOX活(huo)性(xing)測(ce)定(ding)試(shi)劑盒 脂肪(fang)酸系列

正式測(ce)定(ding)前(qian)務必(bi)取(qu) 2-3 個(ge)預期差異(yi)較大的樣(yang)本做預(yu)測(ce)定(ding)測(ce)定(ding)意義：

LOX 廣泛存(cun)在於動植物組(zu)織(zhi)中，催(cui)化(hua)不飽和脂肪(fang)酸氧(yang)化(hua)反(fan)應(ying)，導(dao)致(zhi)膜脂過氧(yang)化(hua)。在生物體(ti)的生長(chang)發(fa)育、成(cheng)熟(shu)衰(shuai)老(lao)及(ji)逆(ni)境脅(xie)迫(po)過程中具(ju)有(you)重要作(zuo)用。

測(ce)定(ding)原(yuan)理(li)：

LOX 催(cui)化(hua)亞you酸(suan)氧(yang)化(hua)，氧(yang)化(hua)產物在 280nm 處有特征吸(xi)收(shou)峰(feng)；測(ce)定(ding) 280nm 吸(xi)光(guang)度增加速率，來(lai)計算(suan) LOX活(huo)性(xing)。

組(zu)成(cheng)：

自備儀器和用品(pin)：

研缽、冰(bing)、臺式離心機(ji)、紫外分(fen)光(guang)光(guang)度計/酶標儀、微量石(shi)英(ying)比色(se)皿(min)/96 孔板(ban)（UV 板(ban)）、可(ke)調式(shi)移液槍(qiang)和蒸(zheng)餾(liu)水(shui)。

粗酶液提(ti)取(qu)：

按(an)照(zhao)組(zu)織(zhi)質(zhi)量(liang)（g）：試(shi)劑壹(yi)體積(ji)(ml)為 1：5~10 的比(bi)例（建(jian)議稱(cheng)取(qu)約 0.1g 組(zu)織(zhi)，加(jia)入 1ml 試(shi)劑壹(yi)）進行冰(bing)浴勻漿(jiang)。16000g，4℃離心 20min，取(qu)上清置(zhi)冰上(shang)待測(ce)。

測(ce)定(ding)：

分(fen)光(guang)光(guang)度計/酶標儀預熱(re) 30 min 以(yi)上，調(tiao)節波長(chang)到 280 nm，蒸(zheng)餾(liu)水(shui)調(tiao)零。

在試(shi)劑三中加(jia)入 10ml 試(shi)劑二（振(zhen)蕩混勻 1min），在 30℃水(shui)浴(yu)中預(yu)熱(re) 10 min 以(yi)上。用(yong)不完的試(shi)劑 4℃

保(bao)存。

對(dui)照(zhao)管(guan)：依次(ci)在微量石(shi)英(ying)比色(se)皿(min)/96 孔(kong)板(ban)中加(jia)入 20μl 樣(yang)本和 180μl 試(shi)劑二，30℃反(fan)應(ying) 30min 後(hou)，記(ji)錄(lu)A對(dui)照(zhao)。

測(ce)定(ding)管(guan)：依次(ci)在微量石(shi)英(ying)比色(se)皿(min)/96 孔(kong)板(ban)中加(jia)入 20μl 樣(yang)本和 180μl 試(shi)劑三，30℃反(fan)應(ying) 30min 後(hou)，記(ji)錄(lu)A測(ce)定(ding)。

ΔA=A 測(ce)定(ding)-A 對(dui)照(zhao)

LOX 活(huo)性(xing)計算(suan)：

按(an)照(zhao)蛋(dan)白(bai)濃(nong)度(du)計算(suan)

活(huo)性(xing)單位(wei)定(ding)義(yi)：25℃中每(mei)毫(hao)克(ke)蛋白(bai)每(mei)分(fen)鐘(zhong)催(cui)化(hua)吸光(guang)值變(bian)化(hua) 0.01 個(ge)單位(wei)為 1 個(ge)酶活(huo)單位(wei)。

LOX (U/mg prot) =ΔA×V 反(fan)總(zong)÷(Cpr×V 樣(yang))÷T×100

= 33.33×ΔA÷Cpr

按(an)照(zhao)樣(yang)本質(zhi)量(liang)計算(suan)

活(huo)性(xing)單位(wei)定(ding)義(yi)：25℃中每(mei)克(ke)組(zu)織(zhi)每(mei)分(fen)鐘(zhong)催(cui)化(hua)吸光(guang)值變(bian)化(hua) 0.01 個(ge)單位(wei)為 1 個(ge)酶活(huo)單位(wei)。

LOX (U/g 鮮(xian)重) =ΔA×V 反(fan)總(zong)÷(W×V 樣(yang)÷V 樣(yang)總)÷T×100

= 33.33×ΔA÷W

Cpr：上(shang)清液(ye)蛋白(bai)濃(nong)度(du)，mg/ml，需另(ling)外測(ce)定(ding)；V 反(fan)總(zong)：反(fan)應(ying)體系總體(ti)積(ji)，200μl=0.2ml；V 樣(yang)：加入反(fan)應(ying)體系中上(shang)清液(ye)體積(ji)，20μl=0.02ml；W ：樣(yang)品(pin)質(zhi)量(liang)，g；V 樣(yang)總：上(shang)清液(ye)總體(ti)積(ji)，1ml；T：反(fan)應(ying)時間(jian)，30min。

脂氧(yang)合(he)酶LOX活(huo)性(xing)測(ce)定(ding)試(shi)劑盒 脂肪(fang)酸系列