利(li)用酯酶(mei)催化(hua)膽(dan)gu醇酯水(shui)解生(sheng)成(cheng)遊(you)離膽(dan)gu醇（FC）和(he)遊(you)離脂(zhi)肪酸(suan)（FFA），從而把膽(dan)gu醇酯轉(zhuan)化(hua)為(wei) FC；進(jin)壹步利(li)用膽(dan)gu醇氧化(hua)酶(mei)催化(hua)FC 氧化(hua)，生(sheng)成(cheng)△4-膽(dan)甾烯(xi)酮和(he)H2O2；最(zui)後(hou)利(li)用過氧化(hua)物(wu)酶(mei)催化(hua) H2O2 氧化(hua) 4-氨基(ji)安(an)ti比(bi)林(lin)和(he)酚(fen)，生(sheng)成(cheng)紅(hong)色醌(kun)類化(hua)合物(wu)；在 500nm 有(you)特征吸收峰，其顏色(se)深(shen)淺與(yu)TC 含(han)量(liang)成(cheng)正比(bi)。
總(zong)膽(dan)gu醇含(han)量(liang)測(ce)定(ding)試劑(ji)盒(he) 脂(zhi)肪酸(suan)系(xi)列(lie)

總(zong)膽(dan)gu醇（total cholesterol，TC）含(han)量(liang)測(ce)定(ding)試劑(ji)盒(he)說明(ming)書

微量(liang)法 100T/96S

總(zong)膽(dan)gu醇含(han)量(liang)測(ce)定(ding)試劑(ji)盒(he) 脂(zhi)肪酸(suan)系(xi)列(lie)

正式(shi)測(ce)定(ding)前(qian)務必(bi)取(qu) 2-3 個預期差(cha)異(yi)較(jiao)大(da)的樣本(ben)做(zuo)預測(ce)定(ding)測(ce)定(ding)意義：

TC 包(bao)括遊離膽(dan)gu醇和(he)膽(dan)gu醇酯。TC 是指(zhi)組織中(zhong)所(suo)有脂(zhi)蛋(dan)白所(suo)含(han)膽(dan)gu醇之總(zong)和(he)。

測(ce)定(ding)原(yuan)理：

利(li)用酯酶(mei)催化(hua)膽(dan)gu醇酯水(shui)解生(sheng)成(cheng)遊(you)離膽(dan)gu醇（FC）和(he)遊(you)離脂(zhi)肪酸(suan)（FFA），從而把膽(dan)gu醇酯轉(zhuan)化(hua)為(wei) FC；進(jin)壹步利(li)用膽(dan)gu醇氧化(hua)酶(mei)催化(hua)FC 氧化(hua)，生(sheng)成(cheng)△4-膽(dan)甾烯(xi)酮和(he)H2O2；最(zui)後(hou)利(li)用過氧化(hua)物(wu)酶(mei)催化(hua) H2O2 氧化(hua) 4-氨基(ji)安ti比(bi)林(lin)和(he)酚(fen)，生(sheng)成(cheng)紅(hong)色醌(kun)類化(hua)合物(wu)；在 500nm 有特(te)征吸(xi)收峰，其顏色(se)深(shen)淺與(yu)TC 含(han)量(liang)成(cheng)正比(bi)。

組成(cheng)：

TC 標準品：液(ye)體(ti) 1ml×1 支，0.5μmol/ml，4℃保(bao)存(cun)。

自備(bei)儀器和(he)用(yong)品：

水(shui)浴鍋(guo)、可(ke)調(tiao)式(shi)移(yi)液(ye)槍(qiang)、酶(mei)標儀、96 孔(kong)板(ban)。

TC 的提(ti)取(qu)：

1、組織中(zhong)TC 的提(ti)取(qu)：按照組織質(zhi)量（g）：試劑(ji)壹體(ti)積(ml)為(wei) 1：5~10 的比(bi)例(li)（建議稱取(qu)約(yue) 0.1g 組織，加(jia)入 1ml 試劑(ji)壹）進(jin)行冰(bing)浴勻(yun)漿，8000g 4℃離心(xin) 10min，取(qu)上(shang)清(qing)，即TC 待(dai)測(ce)液(ye)。

2、細胞、細菌(jun)中(zhong)TC 的提(ti)取(qu)：先收集(ji) 400-500 萬(wan)細胞或細(xi)菌(jun)到(dao)離心(xin)管(guan)內(nei)，棄(qi)上清(qing)，加 1ml 試劑(ji)壹，超(chao)聲(sheng)波(bo)破(po)碎 1min（強度(du) 20％，超(chao)聲(sheng) 2s，停(ting) 1s），即TC 待測(ce)液(ye)。

3、血(xue)清(qing)（漿）等樣品：直(zhi)接(jie)測(ce)定(ding)。

測(ce)定(ding)操(cao)作：

/酶(mei)標儀預(yu)熱(re) 30 min，調(tiao)節(jie)波(bo)長(chang)到(dao) 500 nm。

TC 工(gong)作液(ye)的配(pei)制(zhi)：臨用前(qian)，吸(xi)取(qu)約(yue) 0.8ml 試劑(ji)二(er)分別加(jia)入試劑(ji)三和(he)試劑(ji)四(si)瓶中，充(chong)分溶(rong)解後(hou)再全(quan)部轉(zhuan)移(yi)回(hui)試劑(ji)二(er)瓶中，充(chong)分混(hun)勻(yun)，TC 工(gong)作液(ye)置於 37℃水(shui)浴 10min。用(yong)不完的工(gong)作液(ye) 4℃保(bao)存(cun)壹周。

標準管(guan)：依次(ci)在 96 孔板(ban)中加(jia)入 20μl FC 標準液(ye)和(he) 180μl TC 工(gong)作液(ye)，混勻，37℃靜置 3h 後(hou)於 500nm 測(ce)定(ding)A 標準管(guan)。

測(ce)定(ding)管(guan)：依次(ci)在 96 孔板(ban)中加(jia)入 20μl FC 待(dai)測(ce)液(ye)和(he) 180μlTC 工(gong)作液(ye)，混勻，37℃靜置 3h 後(hou)於 500nm 測(ce)定(ding)A 測(ce)定(ding)管(guan)。

空(kong)白管(guan)：依次(ci)在 96 孔板(ban)中加(jia)入 20μl 試劑(ji)壹和(he) 180μlTC 工(gong)作液(ye)，混勻，37℃靜置 3h 後(hou)於 500nm 測(ce)定(ding)A測(ce)定(ding)管(guan)。

註意：標準管(guan)和(he)空(kong)白管(guan)只需(xu)測(ce)定(ding)壹次(ci)。

計算公式(shi)：

血(xue)清(qing)（漿）中(zhong)TC 含(han)量(liang)計算：

TC（μ mol /dL）=C 標準液(ye)×（A 測(ce)定(ding)管(guan)-A 空(kong)白管(guan)）÷（A 標準管(guan)-A 空(kong)白管(guan)）×100

=50×（A 測(ce)定(ding)管(guan)-A 空(kong)白管(guan)）÷（A 標準管(guan)-A 空(kong)白管(guan)）

C 標準液(ye)：0.5μmol/ml；100 ml：1dL=100 ml。

組織中(zhong)TC 含(han)量(liang)計算：

按樣本(ben)蛋(dan)白濃(nong)度(du)計算

TC（μ mol / mg prot）= C 標準液(ye)×（A 測(ce)定(ding)管(guan)-A 空(kong)白管(guan)）÷（A 標準管(guan)-A 空(kong)白管(guan)）÷Cpr

= 0.5×（A 測(ce)定(ding)管(guan)-A 空(kong)白管(guan)）÷（A 標準管(guan)-A 空(kong)白管(guan)）÷Cpr

按樣本(ben)質(zhi)量計算

TC（μ mol / g 鮮重）= C 標準液(ye)×（A 測(ce)定(ding)管(guan)-A 空(kong)白管(guan)）÷（A 標準管(guan)-A 空(kong)白管(guan)）÷W

= 0.5×（A 測(ce)定(ding)管(guan)-A 空(kong)白管(guan)）÷（A 標準管(guan)-A 空(kong)白管(guan)）÷W C 標準液(ye)：0.5μmol/ml；樣本(ben)蛋(dan)白濃(nong)度(du)，mg/ml；W：樣本(ben)質(zhi)量，g/ml

細胞、細菌(jun)中(zhong)TC 含(han)量(liang)計算：

TC（μ mol /104 cell）=C 標準液(ye)×（A 測(ce)定(ding)管(guan)-A 空(kong)白管(guan)）÷（A 標準管(guan)-A 空(kong)白管(guan)）÷細菌(jun)或(huo)細胞（104 cell /L）

=0.5×（A 測(ce)定(ding)管(guan)-A 空(kong)白管(guan)）÷（A 標準管(guan)-A 空(kong)白管(guan)）÷細菌(jun)或(huo)細胞（104 cell /L） C 標準液(ye)：0.5μmol/ml。

最(zui)di檢(jian)出(chu)限(xian)為(wei) 1nmol/ml。

總(zong)膽(dan)gu醇含(han)量(liang)測(ce)定(ding)試劑(ji)盒(he) 脂(zhi)肪酸(suan)系(xi)列(lie)