FC 是(shi)構成(cheng)細(xi)胞膜(mo)的(de)主(zhu)要(yao)成分，也是(shi)合成(cheng)腎上(shang)腺皮(pi)質激素(su)、性激(ji)素(su)、膽(dan)汁(zhi)酸(suan)及(ji)維(wei)生(sheng)素(su) D 等生(sheng)理(li)活(huo)性物質的重(zhong)要(yao)原料(liao)。FC 濃(nong)度可作為脂(zhi)代(dai)謝(xie)的(de)指標(biao)。
遊(you)離膽(dan)gu醇(chun)含(han)量(liang)測(ce)定(ding)試(shi)劑(ji)盒(he) 脂(zhi)肪(fang)酸(suan)系列(lie)

遊(you)離膽(dan)gu醇(chun)（free cholesterol, FC）含(han)量(liang)測(ce)定(ding)試(shi)劑(ji)盒(he)說(shuo)明書

微(wei)量(liang)法(fa) 100T/96S

遊(you)離膽(dan)gu醇(chun)含(han)量(liang)測(ce)定(ding)試(shi)劑(ji)盒(he) 脂(zhi)肪(fang)酸(suan)系列(lie)

正(zheng)式(shi)測(ce)定(ding)前務(wu)必(bi)取(qu) 2-3 個(ge)預(yu)期差(cha)異(yi)較(jiao)大的樣本(ben)做(zuo)預(yu)測(ce)定(ding)測(ce)定(ding)意義(yi)：

FC 是(shi)構成(cheng)細(xi)胞膜(mo)的(de)主(zhu)要(yao)成分，也是(shi)合成(cheng)腎上(shang)腺皮(pi)質激素(su)、性(xing)激(ji)素(su)、膽(dan)汁(zhi)酸(suan)及(ji)維(wei)生(sheng)素(su) D 等生(sheng)理(li)活(huo)性物質(zhi)的(de)重(zhong)要(yao)原料(liao)。FC 濃(nong)度可作為脂(zhi)代(dai)謝(xie)的(de)指標(biao)。

測(ce)定(ding)原理(li)：

FC 氧化酶(mei)催化FC 生(sheng)成△4-膽(dan)甾(zai)烯(xi)酮和(he)H2O2，過氧化物酶(mei)催化 H2O2、4-氨基(ji)安ti比林(lin)和(he)酚生(sheng)成紅(hong)色醌(kun)類(lei)化合物，在 500nm 有(you)吸收峰，其(qi)顏(yan)色深(shen)淺與(yu)FC 含(han)量(liang)成(cheng)正(zheng)比。

組(zu)成(cheng)：

TC 標(biao)準(zhun)品(pin)：液體(ti) 1ml×1 支，0.5μmol/ml，4℃保存(cun)。

自(zi)備(bei)儀(yi)器和(he)用品(pin)：

水(shui)浴(yu)鍋(guo)、可(ke)調(tiao)式(shi)移(yi)液槍(qiang)、酶(mei)標(biao)儀(yi)、96 孔板(ban)、異(yi)丙醇和(he)蒸餾(liu)水。

FC 的(de)提(ti)取(qu)：

組(zu)織：按照組(zu)織質(zhi)量(liang)（g）：試(shi)劑(ji)壹(yi)體(ti)積(ml)為 1：5~10 的(de)比例(li)（建(jian)議稱(cheng)取(qu)約 0.1g 組(zu)織，加(jia)入(ru) 1ml 試(shi)劑(ji)壹(yi)）進行冰(bing)浴(yu)勻漿。8000g，4℃離(li)心 10min，取(qu)上(shang)清(qing)置冰上(shang)待測(ce)。

細(xi)菌、真(zhen)菌(jun)：先(xian)收集(ji) 400-500 萬細(xi)胞或(huo)細(xi)菌到(dao)離(li)心(xin)管內，棄上(shang)清(qing)，加 1ml 試(shi)劑(ji)壹(yi)，超(chao)聲波破碎(sui) 1min（強度 20％，超聲 2s，停(ting) 1s），即(ji)FC 待測(ce)液。

血(xue)清(qing)（漿）樣品(pin)：直接(jie)測(ce)定(ding)。

測(ce)定(ding)操作：

酶(mei)標(biao)儀(yi)預(yu)熱 30 min，調(tiao)節波長到(dao) 500 nm。

FC 工(gong)作液的(de)配制：臨用前，吸取(qu)約 0.8ml 試(shi)劑(ji)二分別加(jia)入(ru)試(shi)劑(ji)三(san)和(he)試(shi)劑(ji)四(si)瓶中(zhong)，充(chong)分溶解(jie)後再全(quan)部轉(zhuan)移(yi)回試(shi)劑(ji)二瓶中，充(chong)分混(hun)勻，FC 工作液置於 37℃水(shui)浴(yu) 10min。用不完的工作液 4℃保存(cun)壹(yi)周(zhou)。

標(biao)準(zhun)管：依次在 96 孔板(ban)中加(jia)入(ru) 20μl FC 標(biao)準(zhun)液和(he) 180μl FC 工作液，混(hun)勻，37℃靜(jing)置 3h 後於500nm 測(ce)定(ding)A 標(biao)準(zhun)管。

測(ce)定(ding)管：依次在 96 孔板(ban)中加(jia)入(ru) 20μl FC 待測(ce)液和(he) 180μl FC 工作液，混(hun)勻，37℃靜(jing)置 3h 後於 500nm 測(ce)定(ding)A 測(ce)定(ding)管。

5、空(kong)白(bai)管：依次在 96 孔板(ban)中加(jia)入(ru) 20μl 試(shi)劑(ji)壹(yi)和(he) 180μl FC 工作液，混(hun)勻，37℃靜(jing)置 3h 後於 500nm 測(ce)定(ding)A 測(ce)定(ding)管。

註(zhu)意事(shi)項(xiang)：

1、標(biao)準(zhun)管和(he)空白(bai)管只要(yao)做(zuo)壹管。

2、若(ruo)測(ce)定(ding)管產(chan)生(sheng)白色渾(hun)濁，可(ke)以(yi)將待測(ce)液用異(yi)丙醇稀(xi)釋(shi) 2~5 倍後測(ce)定(ding)，並在最後結(jie)果乘(cheng)以(yi)相(xiang)應倍數(shu)。計(ji)算(suan)公(gong)式(shi)：

血(xue)清(qing)（漿）中FC 含(han)量(liang)計(ji)算(suan)：

FC 含(han)量(liang)（μmol /dL）= C 標(biao)準(zhun)液×（A 測(ce)定(ding)管-A 空白管）÷（A 標(biao)準(zhun)管-A 空白管）×100ml

=50×（A 測(ce)定(ding)管-A 空白管）÷（A 標(biao)準(zhun)管-A 空白管）

C 標(biao)準(zhun)液：0.5μmol/ml；100 ml：1dL=100 ml。

組(zu)織中(zhong)FC 含(han)量(liang)計(ji)算(suan)：

按樣本(ben)蛋白濃(nong)度計(ji)算(suan)

FC 含(han)量(liang)（μmol / mg prot）= C 標(biao)準(zhun)液×（A 測(ce)定(ding)管-A 空白管）÷（A 標(biao)準(zhun)管-A 空白管）÷Cpr

= 0.5×（A 測(ce)定(ding)管-A 空白管）÷（A 標(biao)準(zhun)管-A 空白管）÷Cpr

按樣本(ben)鮮(xian)重(zhong)計(ji)算(suan)

FC 含(han)量(liang)（μmol / g 鮮(xian)重(zhong)）= C 標(biao)準(zhun)液×（A 測(ce)定(ding)管-A 空白管）÷（A 標(biao)準(zhun)管-A 空白管）÷W

= 0.5×（A 測(ce)定(ding)管-A 空白管）÷（A 標(biao)準(zhun)管-A 空白管）÷W C 標(biao)準(zhun)液：0.5μmol/ml；Cpr：樣本(ben)蛋白濃(nong)度，mg/ml；W：樣本(ben)質量(liang)，g/ml

細(xi)胞、細(xi)菌中(zhong)FC 含(han)量(liang)計(ji)算(suan)：

FC 含(han)量(liang)（μmol /104 cell）= C 標(biao)準(zhun)液×（A 測(ce)定(ding)管-A 空白管）÷（A 標(biao)準(zhun)管-A 空白管）÷細(xi)菌或(huo)細(xi)胞（104 cell

/L）=0.5×（A 測(ce)定(ding)管-A 空白管）÷（A 標(biao)準(zhun)管-A 空白管）÷細(xi)菌或(huo)細(xi)胞（104 cell /L） C 標(biao)準(zhun)液：0.5μmol/ml。

最di檢出限(xian)為 1nmol/ml。

遊(you)離膽(dan)gu醇(chun)含(han)量(liang)測(ce)定(ding)試(shi)劑(ji)盒(he) 脂(zhi)肪(fang)酸(suan)系列(lie)