磷脂酶(mei)D 催(cui)化水(shui)解磷脂酰dan堿(jian)末(mo)端(duan)的磷脂酰二(er)酯(zhi)鍵(jian)生(sheng)成磷脂酸(suan)和dan堿(jian)，dan堿(jian)在dan堿(jian)氧化酶(mei)催(cui)化作(zuo)用下(xia)生成甜(tian)菜(cai)堿(jian)和(he)過氧化氫，過氧化氫在過氧化氫酶(mei)的作用下(xia)將(jiang) 4-氨基安(an)ti比(bi)林和重(zhong)蒸(zheng)酚(fen)氧化成粉(fen)紅色(se)物質(zhi)，在 500nm 處(chu)有(you)特征吸(xi)收峰。
磷脂酶(mei)D試劑盒 脂肪(fang)酸(suan)系(xi)列

磷脂酶(mei)D（ Phospholipases D，PLD ）試劑盒說明(ming)書

微(wei)量法(fa) 100T/96S

磷脂酶(mei)D試劑盒 脂肪(fang)酸(suan)系(xi)列

正式(shi)測(ce)定前(qian)務必取(qu) 2-3 個預(yu)期差(cha)異較(jiao)大的樣(yang)本(ben)做(zuo)預測(ce)定測定(ding)意(yi)義：

磷脂酶(mei) D（EC3.1.4.4）即磷脂酰dan堿(jian)水(shui)解酶(mei)，是(shi)催(cui)化磷酸(suan)二(er)酯(zhi)鍵(jian)水(shui)解和堿(jian)基交換反應(ying)的壹類(lei)酶(mei)的總(zong)稱，廣泛(fan)存在於(yu)高(gao)等動(dong)植(zhi)物和(he)細菌(jun)等多(duo)種(zhong)生(sheng)物體(ti)中，具有參(can)與(yu)細胞(bao)脂(zhi)質(zhi)代(dai)謝(xie)、信號(hao)傳導(dao)、生(sheng)物膜形成的抗逆境脅(xie)等生理功能(neng)。

測(ce)定原理：

磷脂酶(mei)D 催(cui)化水(shui)解磷脂酰dan堿(jian)末(mo)端(duan)的磷脂酰二(er)酯(zhi)鍵(jian)生(sheng)成磷脂酸(suan)和dan堿(jian)，dan堿(jian)在dan堿(jian)氧化酶(mei)催(cui)化作(zuo)用下(xia)生成甜(tian)菜(cai)堿(jian)和(he)過氧化氫，過氧化氫在過氧化氫酶(mei)的作用下(xia)將(jiang) 4-氨基安(an)ti比(bi)林和重(zhong)蒸(zheng)酚(fen)氧化成粉(fen)紅色(se)物質(zhi)，在 500nm 處(chu)有(you)特征吸(xi)收峰。

組成：

試劑三：粉(fen)劑×1 支，-20℃避(bi)光(guang)保存。臨(lin)用前(qian)加 1ml 無(wu)水乙(yi)醇充(chong)分(fen)溶(rong)解；用不(bu)完的試劑分(fen)裝(zhuang)後-20℃保存，禁(jin)止反復(fu)凍(dong)融。

自(zi)備儀器和(he)用(yong)品(pin)：

天(tian)平(ping)、研(yan)缽、超(chao)速(su)冷(leng)凍(dong)離心機、可(ke)見(jian)分(fen)光(guang)光(guang)度計(ji)/酶(mei)標儀、微(wei)量石(shi)英(ying)比(bi)色皿/96 孔板、恒(heng)溫(wen)水浴(yu)鍋(guo)、無(wu)水乙(yi)醇。

酶(mei)液提取(qu)：

組織：按(an)照質(zhi)量(liang)（g）：提取(qu)液體(ti)積(ml)為 1：5~10 的比(bi)例(li)（建(jian)議稱取(qu)約(yue) 0.1g，加入 1ml 提取(qu)液）加入提取(qu)液，冰浴(yu)勻(yun)漿(jiang)後於(yu) 4℃，10000g 離心 5min，取(qu)全(quan)部(bu)上清於(yu) 4℃、100000g 離心 30min，棄上清，取(qu)沈(chen)澱(dian)溶(rong)於(yu) 1ml 試劑壹。

細胞(bao)：按(an)照細胞(bao)數量(liang)（104 個）：提取(qu)液體(ti)積（ml）為 500~1000：1 的比(bi)例(li)（建(jian)議 500 萬(wan)細胞(bao)加(jia)入 1ml提取(qu)液），冰浴(yu)超(chao)聲(sheng)波(bo)破碎細胞(bao)（功率(lv) 300w，超(chao)聲(sheng) 3 秒(miao)，間隔 7 秒(miao)，總(zong)時(shi)間 3min）；然(ran)後於(yu) 4℃，10000g離心 5min，取(qu)全(quan)部(bu)上清於(yu) 4℃、100000g 離心 30min，棄上清，取(qu)沈(chen)澱(dian)溶(rong)於(yu) 1ml 試劑壹。

血(xue)清：直接測(ce)定(ding)。

測(ce)定操作：

酶(mei)活計(ji)算公式(shi)：

用(yong)微(wei)量石(shi)英(ying)比(bi)色皿測(ce)定(ding)的計(ji)算公式(shi)如(ru)下(xia)

按(an)照蛋(dan)白濃度(du)計(ji)算

酶(mei)活性(xing)定義(yi)：每(mei)毫(hao)克蛋(dan)白每(mei)分(fen)鐘水(shui)解磷脂酰dan堿(jian)產(chan)生 1nmol dan堿(jian)所需(xu)的酶(mei)量為(wei)壹個酶(mei)活力單位(wei)。

PLD 活性(xing)（nmol/min /mg prot）=

A測(ce)定管 ×C 標準(zhun)÷Cpr÷T= 16.7× A測(ce)定管 ÷Cpr

按(an)照樣(yang)本(ben)質(zhi)量(liang)計(ji)算

A標準(zhun)管

A標準(zhun)管

酶(mei)活性(xing)定義(yi)：每(mei)克(ke)組織每(mei)分(fen)鐘水(shui)解磷脂酰dan堿(jian)產(chan)生 1nmol dan堿(jian)所需(xu)的酶(mei)量為(wei)壹個酶(mei)活力單位(wei)

PLD 活性(xing)（nmol/min /g 鮮(xian)重）=

A測(ce)定管 ×C 標準(zhun)÷W÷T = 16.7× A測(ce)定(ding)管 ÷W 

按(an)照細胞(bao)數量(liang)計(ji)算

A標準(zhun)管

A標準(zhun)管

酶(mei)活性(xing)定義(yi)：每(mei) 104 個細胞(bao)每(mei)分(fen)鐘水(shui)解磷脂酰dan堿(jian)產(chan)生 1nmol dan堿(jian)所需(xu)的酶(mei)量為(wei)壹個酶(mei)活力單位(wei)。

PLD 活性(xing)（nmol/min /10⁴ cell）=

A測(ce)定管 ×C 標準(zhun)÷細胞(bao)數量(liang)÷T = 16.7× A測(ce)定(ding)管 ÷細胞(bao)數量(liang) 

按(an)照液體(ti)體(ti)積計(ji)算

A標準(zhun)管

A標準(zhun)管

酶(mei)活性(xing)定義(yi)：每(mei)毫(hao)升(sheng)血(xue)清(qing)每分(fen)鐘水(shui)解磷脂酰dan堿(jian)產(chan)生 1nmol dan堿(jian)所需(xu)的酶(mei)量為(wei)壹個酶(mei)活力單位(wei)。 

PLD 活性(xing)（nmol/min /ml）=

A測(ce)定管 ×C 標準(zhun)÷T=16.7× A測(ce)定管

A標準(zhun)管     A標準(zhun)管

C 標準(zhun)：標準(zhun)品(pin)濃度(du)，500nmol/ml；Cpr：樣(yang)本(ben)蛋(dan)白濃度(du)，mg/ml；W：樣(yang)本(ben)質(zhi)量(liang)，g/ml；T：反應(ying)時(shi)間，30min

用(yong) 96 孔板測(ce)定(ding)的計(ji)算公式(shi)如(ru)下(xia)

按(an)照蛋(dan)白濃度(du)計(ji)算

酶(mei)活性(xing)定義(yi)：每(mei)毫(hao)克蛋(dan)白每(mei)分(fen)鐘水(shui)解磷脂酰dan堿(jian)產(chan)生 1nmol dan堿(jian)所需(xu)的酶(mei)量為(wei)壹個酶(mei)活力單位(wei)。

 PLD 活性(xing)（nmol/min /mg prot）=

A測(ce)定管 ×C 標準(zhun)÷Cpr÷T= 16.7× A測(ce)定管 ÷Cpr

按(an)照樣(yang)本(ben)質(zhi)量(liang)計(ji)算

A標準(zhun)管

A標準(zhun)管

酶(mei)活性(xing)定義(yi)：每(mei)克(ke)組織每(mei)分(fen)鐘水(shui)解磷脂酰dan堿(jian)產(chan)生 1nmol dan堿(jian)所需(xu)的酶(mei)量為(wei)壹個酶(mei)活力單位(wei)。

 PLD 活性(xing)（nmol/min /g 鮮(xian)重）=

A測(ce)定管 ×C 標準(zhun)÷W÷T = 16.7× A測(ce)定(ding)管 ÷W

按(an)照細胞(bao)數量(liang)計(ji)算

A標準(zhun)管

A標準(zhun)管

酶(mei)活性(xing)定義(yi)：每(mei) 10⁴ 個細胞(bao)每(mei)分(fen)鐘水(shui)解磷脂酰dan堿(jian)產(chan)生 1nmol dan堿(jian)所需(xu)的酶(mei)量為(wei)壹個酶(mei)活力單位(wei)。

PLD 活性(xing)（nmol/min /10⁴ cell）=

A測(ce)定管 ×C 標準(zhun)÷細胞(bao)數量(liang)÷T = 16.7× A測(ce)定(ding)管 ÷細胞(bao)數量(liang)按(an)照液體(ti)體(ti)積計(ji)算

A標準(zhun)管

A標準(zhun)管

酶(mei)活性(xing)定義(yi)：每(mei)毫(hao)升(sheng)血(xue)清(qing)每分(fen)鐘水(shui)解磷脂酰dan堿(jian)產(chan)生 1nmol dan堿(jian)所需(xu)的酶(mei)量為(wei)壹個酶(mei)活力單位(wei)。

 PLD 活性(xing)（nmol/min /ml）=

A測(ce)定管 ×C 標準(zhun)÷T=16.7× A測(ce)定管

A標準(zhun)管     A標準(zhun)管

C 標準(zhun)：標準(zhun)品(pin)濃度(du)，500nmol/ml；Cpr：樣(yang)本(ben)蛋(dan)白濃度(du)，mg/ml；W：樣(yang)本(ben)質(zhi)量(liang)，g/ml；T：反應(ying)時(shi)間，30min

註(zhu)意(yi)事項(xiang)：

顯(xian)色完成後，若(ruo)有(you)沈(chen)澱(dian)，於(yu) 8000rpm，25℃離心 5min 後取(qu)上清測定。

吸(xi)光(guang)值不(bu)宜超(chao)過 1，否則(ze)用(yong)試劑壹將(jiang)酶(mei)液進(jin)行(xing)稀(xi)釋(shi)，並(bing)在計(ji)算公式(shi)中乘以(yi)稀(xi)釋(shi)倍(bei)數。

磷脂酶(mei)D試劑盒 脂肪(fang)酸(suan)系(xi)列