磷(lin)脂(zhi)酶(mei)C（EC3.1.4.3）是壹(yi)種(zhong)水(shui)解甘(gan)油(you)磷酸酯C3 位點(dian)甘油磷(lin)酸(suan)酯鍵的(de)脂(zhi)類(lei)水(shui)解酶(mei)，廣泛存(cun)在於(yu)微生(sheng)物(wu)及動(dong)植(zhi)物的(de)組織(zhi)和(he)細胞中，在細(xi)胞代謝(xie)、細(xi)胞傳(chuan)遞、生(sheng)長發育(yu)等(deng)方面具(ju)有(you)重要(yao)作用。
磷(lin)脂(zhi)酶(mei) C試(shi)劑(ji)盒(he) 脂(zhi)肪(fang)酸系(xi)列

磷脂(zhi)酶(mei) C（ Phospholipases C，PLC ）試(shi)劑(ji)盒(he)說(shuo)明書

微量法 100T/96S

磷脂(zhi)酶(mei) C試(shi)劑(ji)盒(he) 脂(zhi)肪(fang)酸系(xi)列

正(zheng)式測定(ding)前(qian)務(wu)必(bi)取 2-3 個預期(qi)差(cha)異(yi)較大的(de)樣(yang)本做(zuo)預測(ce)定(ding)測(ce)定意義(yi)：

磷脂(zhi)酶(mei)C（EC3.1.4.3）是壹(yi)種(zhong)水(shui)解甘(gan)油(you)磷酸酯C3 位點(dian)甘油磷(lin)酸(suan)酯鍵的(de)脂(zhi)類(lei)水(shui)解酶(mei)，廣泛存(cun)在於(yu)微生(sheng)物(wu)及動(dong)植(zhi)物的(de)組織(zhi)和(he)細胞中，在細(xi)胞代謝(xie)、細(xi)胞傳(chuan)遞、生(sheng)長發育(yu)等(deng)方面具(ju)有(you)重要(yao)作用。

測定(ding)原理：

磷脂(zhi)酶(mei)C 催化水(shui)解NPPC 產生(sheng)對(dui)硝(xiao)基苯fen，在 410nm 處有(you)特(te)征(zheng)吸(xi)收峰。

組成：

自(zi)備儀器(qi)和(he)用品：

天平(ping)、研(yan)缽(bo)、超速(su)冷(leng)凍(dong)離(li)心機(ji)、可見(jian)分(fen)光光度(du)計/酶(mei)標儀、微量石英(ying)比色(se)皿/96 孔(kong)板、恒(heng)溫(wen)水(shui)浴(yu)鍋(guo)。

酶液(ye)提(ti)取:

組織(zhi)：按(an)照質量（g）：提取液(ye)體(ti)積(ml)為(wei) 1：5~10 的(de)比(bi)例（建(jian)議稱(cheng)取約(yue) 0.1g，加(jia)入(ru) 1ml 提(ti)取液(ye)）加(jia)入(ru)提(ti)取液(ye)，冰(bing)浴(yu)勻(yun)漿後於 4℃，10000g 離(li)心 5min，取全部上清(qing)於 4℃、100000g 離(li)心 30min，棄(qi)上清(qing)，取沈(chen)澱(dian)溶(rong)於(yu) 1ml 試(shi)劑(ji)壹(yi)。

細胞：按照(zhao)細(xi)胞數量（104 個）：提取液(ye)體(ti)積（ml）為(wei) 500~1000：1 的(de)比(bi)例（建(jian)議 500 萬(wan)細胞加(jia)入(ru) 1ml提(ti)取液(ye)），冰(bing)浴(yu)超聲波破(po)碎(sui)細(xi)胞（功率(lv) 300w，超聲 3 秒，間(jian)隔(ge) 7 秒，總(zong)時間(jian) 3min）；然(ran)後於 4℃，10000g離(li)心 5min，取全部上清(qing)於 4℃、100000g 離(li)心 30min，棄(qi)上清(qing)，取沈(chen)澱(dian)溶(rong)於(yu) 1ml 試(shi)劑(ji)壹(yi)。

血清(qing)：直(zhi)接測(ce)定(ding)。

測定(ding)操(cao)作:

酶活(huo)計(ji)算(suan)公(gong)式:

用微量石英(ying)比色(se)皿測(ce)定(ding)的(de)計(ji)算公(gong)式如(ru)下(xia) 標準曲(qu)線(xian)：y = 0.0191x - 0.0103，R2 = 0.9991

按照(zhao)蛋(dan)白濃度(du)計算(suan)

酶活(huo)性(xing)定義(yi)：每毫(hao)克蛋(dan)白每分(fen)鐘水(shui)解NPPC 產(chan)生(sheng) 1nmol 對(dui)硝(xiao)基苯fen所(suo)需(xu)的(de)酶(mei)量為(wei)壹(yi)個酶活力(li)單(dan)位。

PLC 活性(xing)（nmol/min/mg prot）=（△A+0.0103）÷ 0.0191×V 反總(zong)÷(V 樣(yang)×Cpr) ÷T

= 17.45×（△A+0.0103）÷ Cpr

按照(zhao)樣(yang)本質量計算(suan)

酶活(huo)性(xing)定義(yi)：每克(ke)組織(zhi)每(mei)分(fen)鐘水(shui)解NPPC 產(chan)生(sheng) 1nmol 對(dui)硝(xiao)基苯fen所(suo)需(xu)的(de)酶(mei)量為(wei)壹(yi)個酶活力(li)單(dan)位。

PLC 活性(xing)（nmol/min/g 鮮(xian)重(zhong)）=（△A+0.0103）÷ 0.0191×V 反(fan)總(zong)÷(V 樣(yang)÷V 樣(yang)總×W) ÷T

= 17.45×（△A+0.0103）÷ W

按照(zhao)細(xi)胞數量計算(suan)

酶活(huo)性(xing)定義(yi)：每 104 個細胞每分(fen)鐘水(shui)解NPPC 產(chan)生(sheng) 1nmol 對(dui)硝(xiao)基苯fen所(suo)需(xu)的(de)酶(mei)量為(wei)壹(yi)個酶活力(li)單(dan)位。

PLC 活性(xing)（nmol/min/104 cell）=（△A+0.0103）÷ 0.0191×V 反總(zong)÷(V 樣(yang)÷V 樣(yang)總×細(xi)胞數量) ÷T

= 17.45×（△A+0.0103）÷ 細胞數量

按照(zhao)液(ye)體(ti)體積(ji)計(ji)算

酶活(huo)性(xing)定義(yi)：每毫(hao)升血清(qing)每分(fen)鐘水(shui)解NPPC 產(chan)生(sheng) 1nmol 對(dui)硝(xiao)基苯fen所(suo)需(xu)的(de)酶(mei)量為(wei)壹(yi)個酶活力(li)單(dan)位。

PLC 活性(xing)（nmol/min/ml）= （△A+0.0103）÷ 0.0191×V 反總(zong)÷V 樣(yang)÷T

= 17.45×（△A+0.0103）

V 反總(zong)：反(fan)應總(zong)體積，0.2ml；V 樣(yang)：加(jia)入(ru)樣(yang)本體(ti)積，0.02ml；V 樣(yang)總：加(jia)入(ru)提(ti)取液(ye)體(ti)積，1ml；Cpr：樣(yang)本蛋(dan)白濃度(du)，mg/ml；W：樣(yang)本質量，g；T：反應時(shi)間(jian)，30min

用 96 孔(kong)板測(ce)定(ding)的(de)計(ji)算公(gong)式如(ru)下(xia)

標準曲(qu)線(xian)：y = 0.0095x - 0.0103，R2 = 0.9991

按照(zhao)蛋(dan)白濃度(du)計算(suan)

酶活(huo)性(xing)定義(yi)：每毫(hao)克蛋(dan)白每分(fen)鐘水(shui)解NPPC 產(chan)生(sheng) 1nmol 對(dui)硝(xiao)基苯fen所(suo)需(xu)的(de)酶(mei)量為(wei)壹(yi)個酶活力(li)單(dan)位。

PLC 活性(xing)（nmol/min/mg prot）=（△A+0.0103）÷ 0.0095×V 反總(zong)÷(V 樣(yang)×Cpr) ÷T

= 35.09×（△A+0.0103）÷ Cpr

按照(zhao)樣(yang)本質量計算(suan)

酶活(huo)性(xing)定義(yi)：每克(ke)組織(zhi)每(mei)分(fen)鐘水(shui)解NPPC 產(chan)生(sheng) 1nmol 對(dui)硝(xiao)基苯fen所(suo)需(xu)的(de)酶(mei)量為(wei)壹(yi)個酶活力(li)單(dan)位。

PLC 活性(xing)（nmol/min/g 鮮(xian)重(zhong)）=（△A+0.0103）÷ 0.0095×V 反(fan)總(zong)÷(V 樣(yang)÷V 樣(yang)總×W) ÷T

= 35.09×（△A+0.0103）÷ W

按照(zhao)細(xi)胞數量計算(suan)

酶活(huo)性(xing)定義(yi)：每 104 個細胞每分(fen)鐘水(shui)解NPPC 產(chan)生(sheng) 1nmol 對(dui)硝(xiao)基苯fen所(suo)需(xu)的(de)酶(mei)量為(wei)壹(yi)個酶活力(li)單(dan)位。

PLC 活性(xing)（nmol/min/104 cell）=（△A+0.0103）÷ 0.0095×V 反總(zong)÷(V 樣(yang)÷V 樣(yang)總×細(xi)胞數量) ÷T

=35.09×（△A+0.0103）÷ 細胞數量

按照(zhao)液(ye)體(ti)體積(ji)計(ji)算

酶活(huo)性(xing)定義(yi)：每毫(hao)升血清(qing)每分(fen)鐘水(shui)解NPPC 產(chan)生(sheng) 1nmol 對(dui)硝(xiao)基苯fen所(suo)需(xu)的(de)酶(mei)量為(wei)壹(yi)個酶活力(li)單(dan)位。

PLC 活性(xing)（nmol/min/ml）= （△A+0.0103）÷ 0.0095×V 反總(zong)÷V 樣(yang)÷T

= 35.09×（△A+0.0103）

V 反總(zong)：反(fan)應總(zong)體積，0.2ml；V 樣(yang)：加(jia)入(ru)樣(yang)本體(ti)積，0.02ml；V 樣(yang)總：加(jia)入(ru)提(ti)取液(ye)體(ti)積，1ml；Cpr：樣(yang)本蛋(dan)白濃度(du)，mg/ml；W：樣(yang)本質量，g；T：反應時(shi)間(jian)，30min

磷脂(zhi)酶(mei) C試(shi)劑(ji)盒(he) 脂(zhi)肪(fang)酸系(xi)列