磷脂酶(mei)A2 作(zuo)用於 2-硫(liu)代(dai)十(shi)六酰乙(yi)基(ji)磷酸(suan)dan堿(jian)（HEPC）產(chan)生遊(you)離(li)巰基(ji)，與(yu)DTNB 反(fan)應(ying)生成(cheng)黃色物質(zhi)，在 412nm 處有特(te)征(zheng)吸收峰。
磷(lin)脂(zhi)酶(mei)A2試劑(ji)盒 脂(zhi)肪酸(suan)系列

磷脂酶(mei)A2（phospholipase A2，PLA2）試劑(ji)盒說(shuo)明書(shu)

微(wei)量(liang)法(fa) 100T/48S

磷脂酶(mei)A2試劑(ji)盒 脂(zhi)肪酸(suan)系列

正式測(ce)定前(qian)務必(bi)取(qu) 2-3 個(ge)預期差(cha)異較(jiao)大的樣本做預測定測定意義(yi)：

磷脂酶(mei)A2（EC3.1.1.4）是磷(lin)脂(zhi)sn-2 位脂(zhi)酰(xian)基水(shui)解酶(mei)，廣(guang)泛存(cun)在(zai)於動植(zhi)物組(zu)織(zhi)、細(xi)菌、細(xi)胞核分(fen)泌(mi)物中(zhong)，參與(yu)脂(zhi)肪消(xiao)化，精(jing)子(zi)成(cheng)熟(shu)、細(xi)胞信號傳(chuan)遞(di)、脂(zhi)質(zhi)過(guo)氧化修(xiu)復、宿(xiu)主反(fan)應(ying)等(deng)生理過程(cheng)，在(zai)控制(zhi)體(ti)內(nei)磷(lin)脂類(lei)物質(zhi)平衡、調節(jie)機(ji)體新(xin)陳代(dai)謝(xie)、參與(yu)疾(ji)病(bing)的病(bing)理進程(cheng)等(deng)方(fang)面發揮著及(ji)其重要的作(zuo)用。

測定原理：

磷脂酶(mei)A2 作(zuo)用於 2-硫代(dai)十(shi)六酰乙(yi)基(ji)磷酸(suan)dan堿(jian)（HEPC）產(chan)生遊(you)離(li)巰基(ji)，與(yu)DTNB 反(fan)應(ying)生成(cheng)黃色物質(zhi)，在 412nm 處有特(te)征(zheng)吸收峰。

組(zu)成(cheng)：

試劑(ji)三：液體×5 瓶(ping)，-20℃避光保存(cun)。臨(lin)用(yong)前(qian)根(gen)據用量(liang)每(mei)瓶(ping)加(jia)入(ru) 1.8ml 試劑(ji)二充(chong)分混(hun)勻；用不完的試劑(ji)分裝(zhuang)後(hou)-20℃保存(cun)，禁(jin)止(zhi)反(fan)復(fu)凍(dong)融。

自(zi)備(bei)儀(yi)器(qi)和(he)用(yong)品(pin)：

天平、超速冷(leng)凍(dong)離(li)心機(ji)、研缽、紫外(wai)分光(guang)光(guang)度(du)計/酶(mei)標(biao)儀(yi)、微(wei)量(liang)石(shi)英(ying)比(bi)色(se)皿(min)/96 孔板。

樣品處理：

組(zu)織(zhi)：按照(zhao)質量(liang)（g）：提(ti)取(qu)液體積(ml)為(wei) 1：5~10 的比例(li)（建(jian)議(yi)稱取(qu)約(yue) 0.1g，加(jia)入(ru) 1ml 提(ti)取(qu)液）加(jia)入(ru)提(ti)取(qu)液，冰(bing)浴勻漿後於 4℃，10000g 離(li)心 5min，取(qu)全部(bu)上(shang)清(qing)於 4℃、100000g 離(li)心 30min，棄上(shang)清(qing)，取(qu)沈(chen)澱溶(rong)於 1ml 試劑(ji)壹。

細(xi)胞：按照細(xi)胞數(shu)量(liang)（104 個(ge)）：提取(qu)液體積（ml）為(wei) 500~1000：1 的比例(li)（建(jian)議(yi) 500 萬細(xi)胞加(jia)入(ru) 1ml提(ti)取(qu)液），冰(bing)浴超聲波(bo)破碎細(xi)胞（功率 300w，超(chao)聲 3 秒，間隔(ge) 7 秒(miao)，總時(shi)間 3min）；然(ran)後(hou)於 4℃，10000g離(li)心 5min，取(qu)全部(bu)上(shang)清(qing)於 4℃、100000g 離(li)心 30min，棄上(shang)清(qing)，取(qu)沈(chen)澱溶(rong)於 1ml 試劑(ji)壹。

血清(qing)：直接測定。

測定操(cao)作(zuo):

酶(mei)活計算公式:

用微(wei)量(liang)石(shi)英(ying)比(bi)色(se)皿(min)測定的計算公式如(ru)下

按照蛋白(bai)濃度(du)計算(suan)

酶(mei)活性(xing)定義：每(mei)毫克(ke)蛋(dan)白(bai)每(mei)分鐘水解HEPC 產(chan)生 1nmol 遊(you)離(li)巰基(ji)所(suo)需的酶(mei)量(liang)為(wei)壹個(ge)酶(mei)活力單(dan)位。

PLA2 活性(xing)（nmol/min/mg prot）= △A÷（×d）×V 反總(zong)÷（V 樣×Cpr）÷T

= 73.53×△A÷Cpr

按照樣本質(zhi)量(liang)計(ji)算

酶(mei)活性(xing)定義：每(mei)克組(zu)織(zhi)每分(fen)鐘水解HEPC 產(chan)生 1nmol 遊(you)離(li)巰基(ji)所(suo)需的酶(mei)量(liang)為(wei)壹個(ge)酶(mei)活力單(dan)位。

PLA2 活性(xing)（nmol/min/g 鮮重(zhong)）= △A÷（×d）×V 反總(zong)÷（W×V 樣÷V 樣總）÷T

= 73.53×△A÷W

細(xi)胞數(shu)量(liang)計(ji)算

酶(mei)活性(xing)定義：每(mei) 104 個(ge)細(xi)胞每分鐘水解HEPC 產(chan)生 1nmol 遊(you)離(li)巰基(ji)所(suo)需的酶(mei)量(liang)為(wei)壹個(ge)酶(mei)活力單(dan)位。

PLA2 活性(xing)（nmol/min/104 cell）= △A÷（×d）×V 反總(zong)÷（V 樣×細(xi)胞數(shu)量(liang)÷V 樣(yang)總）÷T

= 73.53×△A÷細(xi)胞數(shu)量(liang)

4 按照液體體積計算(suan)

酶(mei)活性(xing)定義：每(mei)毫升(sheng)血(xue)清(qing)每分(fen)鐘水解HEPC 產(chan)生 1nmol 遊(you)離(li)巰基(ji)所(suo)需的酶(mei)量(liang)為(wei)壹個(ge)酶(mei)活力單(dan)位。

PLA2 活性(xing)（nmol/min/ml）= △A÷（×d）×V 反總(zong)÷V 樣÷T

= 73.53×△A

：TNB 消(xiao)光(guang)系數(shu)，13600L/mol/cm；d：比(bi)色皿光徑(jing)，1cm；V 反總(zong)：反(fan)應(ying)總體(ti)積，1ml；V 樣：反(fan)應(ying)體系中加(jia)入(ru)樣(yang)本(ben)體(ti)積，0.1ml；W：樣本(ben)質量(liang)，g；V 樣(yang)總：加(jia)入(ru)提(ti)取(qu)液體積，1ml；

T：反應(ying)時(shi)間，10min

用 96 孔板測定的計算公式如(ru)下

按照蛋白(bai)濃度(du)計算(suan)

酶(mei)活性(xing)定義：每(mei)毫克(ke)蛋(dan)白(bai)每(mei)分鐘水解HEPC 產(chan)生 1nmol 遊(you)離(li)巰基(ji)所(suo)需的酶(mei)量(liang)為(wei)壹個(ge)酶(mei)活力單(dan)位。

PLA2 活性(xing)（nmol/min/mg prot）= △A÷（×d）×V 反總(zong)÷（V 樣×Cpr）÷T

=147.06×△A÷Cpr

按照樣本質(zhi)量(liang)計(ji)算

酶(mei)活性(xing)定義：每(mei)克組(zu)織(zhi)每分(fen)鐘水解HEPC 產(chan)生 1nmol 遊(you)離(li)巰基(ji)所(suo)需的酶(mei)量(liang)為(wei)壹個(ge)酶(mei)活力單(dan)位。

PLA2 活性(xing)（nmol/min/g 鮮重(zhong)）= △A÷（×d）×V 反總(zong)÷（W×V 樣÷V 樣總）÷T

= 147.06×△A÷W

細(xi)胞數(shu)量(liang)計(ji)算

酶(mei)活性(xing)定義：每(mei) 104 個(ge)細(xi)胞每分鐘水解HEPC 產(chan)生 1nmol 遊(you)離(li)巰基(ji)所(suo)需的酶(mei)量(liang)為(wei)壹個(ge)酶(mei)活力單(dan)位。

PLA2 活性(xing)（nmol/min/104 cell）= △A÷（×d）×V 反總(zong)÷（V 樣×細(xi)胞數(shu)量(liang)÷V 樣(yang)總）÷T

=147.06×△A÷細(xi)胞數(shu)量(liang)

4 按照液體體積計算(suan)

酶(mei)活性(xing)定義：每(mei)毫升(sheng)血(xue)清(qing)每分(fen)鐘水解HEPC 產(chan)生 1nmol 遊(you)離(li)巰基(ji)所(suo)需的酶(mei)量(liang)為(wei)壹個(ge)酶(mei)活力單(dan)位。

PLA2 活性(xing)（nmol/min/ml）= △A÷（×d）×V 反總(zong)÷V 樣÷T

= 147.06×△A

：TNB 消(xiao)光(guang)系數(shu)，13600L/mol/cm；d：比(bi)色皿光徑(jing)，0.5cm；V 反總(zong)：反(fan)應(ying)總體(ti)積，1ml；V 樣：反(fan)應(ying)體系中加(jia)入(ru)樣(yang)本(ben)體(ti)積，0.1ml；W：樣本(ben)質量(liang)，g；V 樣(yang)總：加(jia)入(ru)提(ti)取(qu)液體積，1ml；

T：反應(ying)時(shi)間，10min

磷脂酶(mei)A2試劑(ji)盒 脂(zhi)肪酸(suan)系列