GCS 催(cui)化(hua)UDPG 和(he)葡萄(tao)糖殘基(ji)生(sheng)成(cheng)糖原和(he)UDP，丙tong酸(suan)激(ji)酶和(he)乳酸(suan)脫氫酶進壹(yi)步依次(ci)催化(hua) NADH 氧(yang)化(hua)生(sheng)成(cheng)NAD+，在 340nm 下(xia)測(ce)定(ding)NADH 下(xia)降速(su)率，即可反映 GCS 活性(xing)。
糖原合成(cheng)酶試劑(ji)盒(he) 糖原系列

糖原合成(cheng)酶（Glycogen synthase，GCS）試劑(ji)盒說(shuo)明書(shu)

微量(liang)法 100 管/96 樣(yang)

糖原合成(cheng)酶試劑(ji)盒(he) 糖原系列

正式(shi)測(ce)定(ding)前(qian)務必(bi)取(qu) 2-3 個預期(qi)差(cha)異(yi)較(jiao)大的樣(yang)本做(zuo)預測(ce)定(ding)測(ce)定(ding)意(yi)義：

GCS（EC 2.4.1.11）催化(hua) UDPG 和(he)葡萄(tao)糖殘基(ji)生(sheng)成(cheng)糖原和(he) UTP，以α-1，4-糖苷鍵(jian)相連延長(chang)糖鏈，是肝(gan)和(he)肌(ji)肉糖原合成(cheng)酶的限速(su)酶，是胰(yi)島素作(zuo)用的主要(yao)靶(ba)酶，對糖代謝的調節(jie)和(he)血糖穩(wen)態(tai)的維(wei)持(chi)具有(you)重(zhong)要作(zuo)用。

測(ce)定(ding)原(yuan)理：

GCS 催化(hua)UDPG 和(he)葡萄(tao)糖殘基(ji)生(sheng)成(cheng)糖原和(he)UDP，丙tong酸(suan)激(ji)酶和(he)乳酸(suan)脫氫酶進壹(yi)步依次(ci)催化(hua) NADH 氧(yang)化(hua)生(sheng)成(cheng)NAD⁺，在 340nm 下(xia)測(ce)定(ding)NADH 下(xia)降速(su)率，即可反映 GCS 活性(xing)。

組成：

自備儀器和(he)用品(pin)：

分(fen)光(guang)光(guang)度(du)計(ji)/酶標儀、臺(tai)式離(li)心(xin)機(ji)、可(ke)調(tiao)式(shi)移液器、微量(liang)石英比色(se)皿(min)/96 孔板(ban)、研缽(bo)、冰和(he)蒸餾水。

樣(yang)本的前(qian)處理：

按照(zhao)組織質量(liang)（g）：提取液體(ti)積(ji)(ml)為(wei) 1：5~10 的比例(li)（建(jian)議稱(cheng)取約 0.1g 組織，加入 1ml 提取液），進行(xing)冰浴勻(yun)漿。8000g 4℃離(li)心(xin) 10min，取(qu)上(shang)清(qing)，置冰上待(dai)測(ce)。

測(ce)定(ding)步驟(zhou)：

1、分(fen)光(guang)光(guang)度(du)計(ji)或酶標儀預熱(re) 30min 以上(shang)，調(tiao)節波(bo)長(chang)至(zhi) 340nm，蒸(zheng)餾水調零。

2、工作(zuo)液的配制：臨用(yong)前(qian)將試(shi)劑三(san)和(he)試劑(ji)四(si)轉(zhuan)移到試劑(ji)壹(yi)中混(hun)合溶解(jie)待(dai)用(yong)；用(yong)不(bu)完的試劑(ji)分(fen)裝(zhuang)後-20℃保存(cun)，禁止(zhi)反復凍融。

3、試劑(ji)五的配制：臨用(yong)前(qian)在試(shi)劑(ji)五中(zhong)加入 1ml 試劑二充分(fen)溶(rong)解待用(yong)；用(yong)不完的試劑(ji)分(fen)裝(zhuang)後-20℃保存(cun)，禁止(zhi)反復凍融。

4、將工作(zuo)液和(he)試劑(ji)五置於 37℃預熱(re) 5 分(fen)鐘(zhong)。

5、在 1ml 微(wei)量(liang)石英比色(se)皿(min)或 96 孔板(ban)中(zhong)加入 10μl 樣(yang)本、10μl 試(shi)劑(ji)五和(he) 180μl 工作(zuo)液，立(li)即(ji)混(hun)勻(yun)，記錄 340nm處初始(shi)吸(xi)光(guang)值(zhi)A1 和(he) 1min 後的吸(xi)光(guang)值(zhi) A2，計(ji)算(suan)ΔA=A1-A2。

註意(yi)：在該(gai)試(shi)劑盒中，若(ruo)ΔA 大(da)於 0.1，需(xu)將樣(yang)本用(yong)提(ti)取(qu)液稀釋適當倍數(shu)後(hou)測(ce)定(ding)，使(shi)ΔA 小於 0.1 可(ke)提高(gao)檢測(ce)靈(ling)敏度(du)。計(ji)算(suan)公式中(zhong)乘以(yi)相(xiang)應稀釋倍數(shu)。

GCS 活性(xing)計(ji)算(suan)：

用微(wei)量(liang)石英比色(se)皿(min)測(ce)定(ding)的計(ji)算(suan)公式如(ru)下(xia)

按樣(yang)本蛋(dan)白(bai)濃(nong)度(du)計(ji)算(suan)

單(dan)位(wei)定(ding)義：每(mei)mg 組織蛋白(bai)每(mei)分(fen)鐘(zhong)消耗(hao) 1nmol NADH 定(ding)義為(wei)壹個酶活力(li)單(dan)位(wei)。

GCS（nmol/min/mg prot）＝[ΔA×V 反總(zong)÷（ε×d）×109]÷(V 樣(yang)×Cpr) ÷T=3215×ΔA÷Cpr

按樣(yang)本鮮重(zhong)計(ji)算(suan)

單(dan)位(wei)定(ding)義：每(mei)g 組織每分(fen)鐘(zhong)消耗(hao) 1 nmol NADH 定(ding)義為(wei)壹個酶活力(li)單(dan)位(wei)。

GCS（nmol/min/g 鮮重(zhong)）＝[ΔA×V 反總(zong)÷（ε×d）×109]÷(W ×V 樣(yang)÷V 樣(yang)總(zong))÷T=3215×ΔA÷W

V 反總(zong)：反應體(ti)系總(zong)體(ti)積(ji)，2×10-4 L；ε：NADH 摩爾消(xiao)光(guang)系(xi)數(shu)，6.22×103 L / mol /cm；d：比色(se)皿(min)光(guang)徑，1cm； V 樣(yang)：加入樣(yang)本體(ti)積(ji)，0.01 ml；V 樣(yang)總(zong)：加入提取液體(ti)積(ji)，1 ml；T：反應時間，1 min；Cpr：樣(yang)本蛋(dan)白(bai)質濃(nong)度(du)，mg/ml；W：樣(yang)本質量(liang)，g。

用 96 孔(kong)板(ban)測(ce)定(ding)的計(ji)算(suan)公式如(ru)下(xia)

按樣(yang)本蛋(dan)白(bai)濃(nong)度(du)計(ji)算(suan)

單(dan)位(wei)定(ding)義：每(mei)mg 組織蛋白(bai)每(mei)分(fen)鐘(zhong)消耗(hao) 1nmol NADH 定(ding)義為(wei)壹個酶活力(li)單(dan)位(wei)。

GCS（nmol/min/mg prot）＝[ΔA×V 反總(zong)÷（ε×d）×109]÷(V 樣(yang)×Cpr) ÷T=6430×ΔA÷Cpr

按樣(yang)本鮮重(zhong)計(ji)算(suan)

單(dan)位(wei)定(ding)義：每(mei)g 組織每分(fen)鐘(zhong)消耗(hao) 1 nmol NADH 定(ding)義為(wei)壹個酶活力(li)單(dan)位(wei)。

GCS（nmol/min/g 鮮重(zhong)）＝[ΔA×V 反總(zong)÷（ε×d）×109]÷(W ×V 樣(yang)÷V 樣(yang)總(zong))÷T=6430×ΔA÷W

V 反總(zong)：反應體(ti)系總(zong)體(ti)積(ji)，2×10-4 L；ε：NADH 摩爾消(xiao)光(guang)系(xi)數(shu)，6.22×103 L / mol /cm；d：96 孔(kong)板(ban)光(guang)徑，0.5cm； V 樣(yang)：加入樣(yang)本體(ti)積(ji)，0.01ml；V 樣(yang)總(zong)：加入提取液體(ti)積(ji)，1 ml；T：反應時間，1 min；Cpr：樣(yang)本蛋(dan)白(bai)質濃(nong)度(du)，mg/ml；W：樣(yang)本質量(liang)，g。

糖原合成(cheng)酶試劑(ji)盒(he) 糖原系列