UDPG 焦(jiao)磷(lin)酸(suan)化(hua)酶是生(sheng)物(wu)體(ti)糖原(yuan)合(he)成(cheng)過(guo)程中(zhong)的(de)關(guan)鍵(jian)酶。在葡萄(tao)糖合(he)成(cheng)糖原(yuan)前(qian)催化(hua)葡(pu)萄(tao)糖活化(hua)，將(jiang) 1-磷(lin)酸(suan)葡萄(tao)糖與(yu)UTP 分(fen)子合(he)成(cheng)為(wei)UDP-葡萄(tao)糖（UDPG）。
尿苷二磷酸葡萄(tao)糖焦(jiao)磷(lin)酸(suan)化(hua)酶試劑(ji)盒 糖原(yuan)

尿苷二磷酸葡萄(tao)糖焦(jiao)磷(lin)酸(suan)化(hua)酶（UDP-glucose pyrophosphosphprylase，UGP）試(shi)劑(ji)盒說明書

微量法 100 管/96 樣

尿苷二磷酸葡萄(tao)糖焦(jiao)磷(lin)酸(suan)化(hua)酶試劑(ji)盒 糖原(yuan)

正式(shi)測(ce)定前務(wu)必(bi)取 2-3 個預期差(cha)異(yi)較大的樣(yang)本做(zuo)預測(ce)定測(ce)定意義(yi)：

UDPG 焦(jiao)磷(lin)酸(suan)化(hua)酶是生(sheng)物(wu)體(ti)糖原(yuan)合(he)成(cheng)過(guo)程中(zhong)的(de)關(guan)鍵(jian)酶。在葡萄(tao)糖合(he)成(cheng)糖原(yuan)前(qian)催化(hua)葡(pu)萄(tao)糖活化(hua)，將(jiang) 1-磷(lin)酸葡(pu)萄(tao)糖與(yu)UTP 分(fen)子合(he)成(cheng)為(wei)UDP-葡(pu)萄(tao)糖（UDPG）。

測(ce)定原理(li)：

UGP 可(ke)逆催化(hua)反(fan)應(ying)生(sheng)成(cheng) 1 磷(lin)酸葡(pu)萄(tao)糖，在磷酸(suan)葡(pu)萄(tao)糖變位酶和(he) 6-磷酸(suan)葡萄(tao)糖脫氫(qing)酶作用(yong)下(xia)將 NADP轉化(hua)為(wei)NADPH，340nm 的(de)吸光(guang)值增加(jia)速(su)率(lv)反(fan)映(ying)了UGP 活性(xing)。

組成：

試(shi)劑(ji)二：粉劑(ji)×1 瓶(ping)，-20℃保存(cun)。臨用(yong)前(qian)加(jia) 2ml 蒸(zheng)餾水(shui)充分(fen)溶解(jie)；用(yong)不完的(de)試(shi)劑(ji)分(fen)裝(zhuang)後-20℃保(bao)存(cun)，禁(jin)止(zhi)反(fan)復(fu)凍(dong)融。

試(shi)劑(ji)三：粉(fen)劑(ji)×1 瓶(ping)，-20℃保存(cun)。臨用(yong)前(qian)加(jia) 2ml 蒸(zheng)餾水(shui)充分(fen)溶解(jie)；用(yong)不完的(de)試(shi)劑(ji)分(fen)裝(zhuang)後-20℃保(bao)存(cun)，禁(jin)止(zhi)反(fan)復(fu)凍(dong)融。

試(shi)劑(ji)四(si)：粉劑(ji)×1 瓶(ping)，-20℃保存(cun)。臨用(yong)前(qian)加(jia) 2ml 蒸(zheng)餾水(shui)充分(fen)溶解(jie)；用(yong)不完的(de)試(shi)劑(ji)分(fen)裝(zhuang)後-20℃保(bao)存(cun)，禁(jin)止(zhi)反(fan)復(fu)凍(dong)融。

自(zi)備(bei)儀器和(he)用(yong)品(pin)：

天(tian)平(ping)、低(di)溫離心(xin)機(ji)、研(yan)缽(bo)、紫外(wai)分光(guang)光(guang)度(du)計(ji)/酶標儀(yi)、微量石英(ying)比色皿/96 孔板(ban)

酶液(ye)提取：

組織：按(an)照質(zhi)量（g）：提取液(ye)體(ti)積(ji)(ml)為(wei) 1：5~10 的比(bi)例（建議稱取約 0.1g，加(jia)入(ru) 1ml 提取液(ye)）加(jia)入(ru)提取液(ye)，冰浴(yu)勻(yun)漿後於(yu) 4℃，10000g 離心(xin) 10min，取上(shang)清(qing)置冰上(shang)待(dai)測(ce)。

細(xi)胞：按(an)照細(xi)胞數量（104 個）：提取液(ye)體(ti)積(ji)（ml）為(wei) 500~1000：1 的比(bi)例（建議 500 萬(wan)細胞(bao)加(jia)入(ru) 1ml提取液(ye)），冰浴(yu)超(chao)聲波(bo)破(po)碎(sui)細(xi)胞(bao)（功(gong)率(lv) 300w，超(chao)聲(sheng) 3 秒，間隔(ge) 7 秒，總時間 3min）；然(ran)後 4℃，10000g離心(xin) 10min，取上(shang)清(qing)置冰上(shang)待(dai)測(ce)。

液(ye)體(ti)：直(zhi)接(jie)檢(jian)測(ce)。

測(ce)定操作(zuo)：

紫(zi)外分(fen)光(guang)光(guang)度(du)計(ji)/酶標儀(yi)預熱 30min，調節波(bo)長至(zhi) 340nm，蒸(zheng)餾水(shui)調零(ling)。

取微量石英(ying)比色皿/96 孔板(ban)，依(yi)次加(jia)入(ru) 100μl 試(shi)劑(ji)壹(yi)，20μl 試劑(ji)二，20μl 試劑(ji)三，20μl 試(shi)劑(ji)四(si)，20μl試劑(ji)五，20μl 粗(cu)酶液(ye)，充(chong)分(fen)混(hun)勻(yun)，記錄(lu) 340nm 處(chu) 30s 的(de)吸(xi)光(guang)值A1 和(he) 330s 的吸(xi)光(guang)值A2，△A=A2-A1

計(ji)算(suan)公(gong)式(shi)：

使用(yong)微量石英(ying)比色皿測(ce)定的計(ji)算(suan)公(gong)式(shi)如下

按(an)照樣(yang)本蛋(dan)白(bai)濃(nong)度(du)計(ji)算(suan)

酶活單位定義：每(mei)毫克組織蛋(dan)白(bai)每(mei)分鐘(zhong)消耗(hao) 1 nmol 的NADP 定義為(wei)壹個酶活力單位。

UGP（nmol/min /mg prot）＝ΔA÷（ε×d）×V 反(fan)總÷(V 樣(yang)×Cpr) ÷T=321.54×ΔA÷Cpr

按(an)照樣(yang)本質(zhi)量計算(suan)

酶活單位定義：每(mei)克組織每(mei)分鐘(zhong)消耗(hao) 1 nmol 的NADP 定義為(wei)壹個酶活力單位。

UGP（nmol/min /g 鮮(xian)重(zhong)）＝ΔA÷（ε×d）×V 反(fan)總÷(W ×V 樣(yang)÷V 樣總) ÷T=321.54×ΔA÷W

按(an)照細(xi)胞數量計算(suan)

酶活單位定義：每(mei) 104 個細(xi)胞每(mei)分鐘(zhong)消耗(hao) 1 nmol 的NADP 定義為(wei)壹個酶活力單位。

UGP（nmol/min /104 cell）= ΔA÷（ε×d）×V 反(fan)總÷(V 樣(yang)×細胞(bao)數(shu)量÷V 樣總) ÷T

=321.54×ΔA÷細(xi)胞數(shu)量

按(an)照液(ye)體(ti)體(ti)積(ji)計算(suan)

酶活單位定義：每(mei)毫升液(ye)體(ti)每(mei)分鐘(zhong)消耗(hao) 1 nmol 的NADP 定義為(wei)壹個酶活力單位。

UGP（nmol/min /ml）＝ΔA÷（ε×d）×V 反(fan)總÷V 樣(yang)÷T=321.54×ΔA

V 反(fan)總：反(fan)應(ying)體系總體(ti)積(ji)，0.2ml；ε：NADPH 摩爾消(xiao)光(guang)系(xi)數(shu)，6.22×103 L / mol /cm；d：比(bi)色(se)皿光(guang)徑(jing)，1cm； V 樣(yang)：加(jia)入(ru)樣(yang)本體(ti)積(ji)，0.02ml；V 樣總：加(jia)入(ru)提取液(ye)體(ti)積(ji)，1ml；T：反(fan)應(ying)時間，5 min；Cpr：樣(yang)本蛋(dan)白(bai)質(zhi)濃(nong)度(du)，mg/ml；W：樣(yang)本質(zhi)量，g

使用(yong) 96 孔板(ban)測(ce)定的計(ji)算(suan)公(gong)式(shi)如下

按(an)照樣(yang)本蛋(dan)白(bai)濃(nong)度(du)計(ji)算(suan)

酶活單位定義：每(mei)毫克組織蛋(dan)白(bai)每(mei)分鐘(zhong)消耗(hao) 1 nmol 的NADP 定義為(wei)壹個酶活力單位。

UGP（nmol/min /mg prot）＝ΔA÷（ε×d）×V 反(fan)總÷(V 樣(yang)×Cpr) ÷T=643.08×ΔA÷Cpr

按(an)照樣(yang)本質(zhi)量計算(suan)

酶活單位定義：每(mei)克組織每(mei)分鐘(zhong)消耗(hao) 1 nmol 的NADP 定義為(wei)壹個酶活力單位。

UGP（nmol/min /g 鮮(xian)重(zhong)）＝ΔA÷（ε×d）×V 反(fan)總÷(W ×V 樣(yang)÷V 樣總) ÷T=643.08×ΔA÷W

按(an)照細(xi)胞數量計算(suan)

酶活單位定義：每(mei) 104 個細(xi)胞每(mei)分鐘(zhong)消耗(hao) 1 nmol 的NADP 定義為(wei)壹個酶活力單位。

UGP（nmol/min /104 cell）= ΔA÷（ε×d）×V 反(fan)總÷(V 樣(yang)×細胞(bao)數(shu)量÷V 樣總) ÷T

=643.08×ΔA÷細(xi)胞數(shu)量

按(an)照液(ye)體(ti)體(ti)積(ji)計算(suan)

酶活單位定義：每(mei)毫升液(ye)體(ti)每(mei)分鐘(zhong)消耗(hao) 1 nmol 的NADP 定義為(wei)壹個酶活力單位。

UGP（nmol/min /ml）=ΔA÷（ε×d）×V 反(fan)總÷V 樣(yang)÷T=643.08×ΔA

V 反(fan)總：反(fan)應(ying)體系總體(ti)積(ji)，0.2ml；ε：NADPH 摩爾消(xiao)光(guang)系(xi)數(shu)，6.22×103 L / mol /cm；d：比(bi)色(se)皿光(guang)徑(jing)，0.5cm； V 樣(yang)：加(jia)入(ru)樣(yang)本體(ti)積(ji)，0.02ml；V 樣總：加(jia)入(ru)提取液(ye)體(ti)積(ji)，1ml；T：反(fan)應(ying)時間，5 min；Cpr：樣(yang)本蛋(dan)白(bai)質(zhi)濃(nong)度(du)，mg/ml；W：樣(yang)本質(zhi)量，g

尿苷二磷酸葡萄(tao)糖焦(jiao)磷(lin)酸(suan)化(hua)酶試劑(ji)盒 糖原(yuan)