果膠是(shi)構(gou)成細胞(bao)初(chu)生(sheng)壁和(he)中(zhong)膠層(ceng)的主(zhu)要(yao)成(cheng)分(fen)，主(zhu)要(yao)由(you)原(yuan)果膠、果膠酸(suan)甲(jia)酯(zhi)和(he)果膠酸(suan)組(zu)成。果膠中(zhong)含有半乳糖(tang)醛(quan)酸(suan)、乳糖(tang)、阿拉伯(bo)糖、葡(pu)萄(tao)糖(tang)醛酸(suan)等，是(shi)許(xu)多(duo)高等植物細(xi)胞(bao)壁中(zhong)含量最feng富(fu)的多(duo)糖成分，其(qi)du特的物理(li)、化(hua)學(xue)性(xing)質(zhi)影響(xiang)著(zhe)植物源(yuan)食(shi)品的口感和(he)品質(zhi)。
可溶性(xing)果膠WSP含量試劑(ji)盒(he)

可溶性(xing)果膠(WSP)含量試劑(ji)盒(he)說明書(shu)

微(wei)量(liang)法 100 管/48 樣

可溶性(xing)果膠WSP含量試劑(ji)盒(he)

正式測定前(qian)務必(bi)取(qu) 2-3 個(ge)預(yu)期(qi)差(cha)異(yi)較大的樣本做(zuo)預(yu)測定測定意義：

果膠是(shi)構(gou)成細胞(bao)初(chu)生(sheng)壁和(he)中(zhong)膠層(ceng)的主(zhu)要(yao)成(cheng)分(fen)，主(zhu)要(yao)由(you)原(yuan)果膠、果膠酸(suan)甲(jia)酯(zhi)和(he)果膠酸(suan)組(zu)成。果膠中(zhong)含有半乳糖(tang)醛(quan)酸(suan)、乳糖(tang)、阿拉伯(bo)糖、葡(pu)萄(tao)糖(tang)醛酸(suan)等，是(shi)許(xu)多(duo)高等植物細(xi)胞(bao)壁中(zhong)含量最feng富(fu)的多(duo)糖成分，其(qi)獨te的物理(li)、化(hua)學(xue)性(xing)質(zhi)影響(xiang)著(zhe)植物源(yuan)食(shi)品的口感和(he)品質(zhi)。果膠間以(yi)Ca²⁺橋(qiao)及(ji)其(qi)他(ta)離子鍵(jian)、氫鍵、糖(tang)苷(gan)鍵、酯(zhi)鍵和(he)苯(ben)環偶(ou)聯的方(fang)式交(jiao)聯，通(tong)過不(bu)同(tong)的抽(chou)提(ti)方(fang)法可以(yi)提取(qu)各種(zhong)形式(shi)的果膠，如水溶性(xing)果膠（WSP）、離子結合(he)型果膠（ISP）和(he)共價結合(he)果膠（CSP）。

測定原(yuan)理(li)：

利用酸(suan)溶液(ye)提取(qu)得(de)到（WSP）可溶性(xing)果膠，采(cai)用哢(ka)zuo比色法(fa)測定果膠含量。果膠水解成半乳糖(tang)醛(quan)酸(suan)，在(zai)硫(liu)酸(suan)溶液(ye)中(zhong)與哢唑試劑(ji)進行縮合(he)反(fan)應，生(sheng)成物(wu)質在 530 nm 處(chu)有(you)最大(da)吸(xi)收峰。

試劑(ji)的組(zu)成和(he)配(pei)制：

試劑(ji)二(er)：粉劑(ji)×1 支，-20 ℃保存(cun)，用時(shi)加(jia)入(ru) 4ml 蒸(zheng)餾水，混(hun)勻(yun)；用不(bu)完的試劑(ji) 4℃保存(cun)壹周(zhou)；試劑(ji)三：粉劑(ji)×1 支，-20℃保存(cun)，用時(shi)加(jia)入(ru) 4ml 蒸(zheng)餾水，混(hun)勻(yun)；用不(bu)完的試劑(ji) 4℃保存(cun)壹周(zhou)；試劑(ji)四(si)：粉劑(ji)×1 支，4 ℃保存(cun)，用時(shi)加(jia)入(ru) 4ml 蒸(zheng)餾水，混(hun)勻(yun)；用不(bu)完的試劑(ji) 4℃保存(cun)壹周(zhou)；

需自(zi)備儀(yi)器(qi)和(he)用品：

可見(jian)分光(guang)光(guang)度計/酶標儀(yi)、水浴(yu)鍋(guo)、可調(tiao)式移液器、微量(liang)石英玻璃(li)比(bi)色皿(min)/96 孔板、80％乙(yi)醇(chun)、丙酮、濃(nong)硫(liu)酸(suan)（不(bu)允許(xu)快(kuai)遞(di)）、研(yan)缽和(he)蒸(zheng)餾水。

樣品的前(qian)處(chu)理(li)：

1、細(xi)胞(bao)壁的提取(qu)：取(qu)約 0.3g 樣本，加(jia)入(ru) 1ml 80％乙(yi)醇(chun)，室溫快速勻(yun)漿，95℃水浴(yu) 20min，冷(leng)卻至(zhi)室溫，4000g 25℃離心(xin) 10min，棄(qi)上清。沈澱(dian)加(jia)入(ru) 1.5ml80％乙(yi)醇(chun)和(he)丙(bing)酮(tong)各洗(xi)壹遍(bian)（渦(wo)旋振(zhen)蕩 2min 左(zuo)右，4000g

25℃離心(xin) 10min，棄(qi)上清即(ji)可），沈澱(dian)即(ji)為(wei)粗細胞(bao)壁，加(jia)入(ru) 1ml 試劑(ji)壹（去除澱粉）浸(jin)泡(pao) 15 小時，4000g

25℃離心(xin) 10min，棄(qi)上清，將(jiang)沈澱(dian)幹燥，稱重(zhong)得(de)細(xi)胞(bao)壁物(wu)質(zhi)（CWM）。

2、WSP 的提取(qu)：稱取(qu)烘(hong)幹(gan)的CWM 3mg，加(jia)入(ru) 1ml 試劑(ji)二(er)，充分(fen)勻漿(若(ruo)烘(hong)幹(gan)物(wu)質(zhi)質(zhi)地堅(jian)硬(ying)，可先(xian)研(yan)碎後(hou)再(zai)加(jia)入(ru) 1ml 試劑(ji)二(er)勻(yun)漿，或(huo)者用勻(yun)漿器勻(yun)漿)。8000g 4℃離心(xin) 10min，取(qu)上清液(ye)待(dai)測。

測定步(bu)驟(zhou)：

1、分(fen)光(guang)光(guang)度計或(huo)酶標儀(yi)預(yu)熱(re) 30min 以上，調(tiao)節波(bo)長(chang)至(zhi) 530nm 處(chu)，蒸(zheng)餾水調(tiao)零；試劑(ji)三和(he)試劑(ji)四(si) 37℃

預(yu)熱(re) 10min 以上。

2、操(cao)作(zuo)表：

混(hun)勻(yun)

混(hun)勻(yun)，95℃水浴(yu) 5min 後(hou)，冷(leng)卻(que)至(zhi)室溫，取 200µl 至(zhi)微量(liang)石(shi)英比(bi)色皿(min)或(huo) 96 孔板中(zhong)，530nm 處(chu)讀取(qu)吸(xi)光(guang)值(zhi)，空(kong)白(bai)管、標準(zhun)管、對(dui)照(zhao)管和(he)測定管吸(xi)光(guang)值(zhi)分(fen)別(bie)記(ji)為 A1、A2、A3 和(he)A4。若(ruo)A 大(da)於(yu) 2，需將待測樣本用蒸(zheng)餾水稀(xi)釋（可稀(xi)釋 10 倍(bei)或(huo) 20 倍(bei)）。空(kong)白(bai)管和(he)標(biao)準(zhun)管只要(yao)做(zuo)壹管，每個(ge)測定管需設(she)壹個(ge)對(dui)照(zhao)管。

註(zhu)意事(shi)項

最di檢測限為(wei) 50μg /g 幹(gan)重

WSP 含量計(ji)算：

WSP 含量(mg /g 幹(gan)重)= (C 標(biao)準(zhun)×V1) ×(A4-A3)÷(A2-A1)÷(W×V1÷V2) ×稀(xi)釋倍(bei)數

=0.05×(A4-A3)÷(A2-A1)÷W×稀(xi)釋倍(bei)數

C 標(biao)準(zhun)：標準(zhun)管濃(nong)度，0.05mg/ml；V1：加(jia)入(ru)樣本體(ti)積(ji)，0.05ml；V2：加(jia)入(ru)提(ti)取液體(ti)積(ji)，1ml； W：樣本幹(gan)重(zhong)，g。

可溶性(xing)果膠WSP含量試劑(ji)盒(he)