利用帶(dai)有螯(ao)合劑(ji)的(de)堿溶液提取共(gong)價(jia)結(jie)合型果(guo)膠（CSP），采用哢唑比色(se)法(fa)測定(ding)果(guo)膠含量(liang)。果(guo)膠水(shui)解(jie)成(cheng)半(ban)乳糖醛酸(suan)，在(zai)硫(liu)酸(suan)溶液中(zhong)與哢唑試(shi)劑(ji)進行(xing)縮合反應，生成(cheng)物(wu)質在 530 nm 處有最大(da)吸(xi)收(shou)峰(feng)。
共(gong)價(jia)結(jie)合型果(guo)膠CSP含量(liang)試(shi)劑(ji)

共(gong)價(jia)結(jie)合型果(guo)膠(CSP)含量(liang)試(shi)劑(ji)盒(he)說(shuo)明(ming)書

微量(liang)法(fa) 100 管/48 樣

共(gong)價(jia)結(jie)合型果(guo)膠CSP含量(liang)試(shi)劑(ji)

正式(shi)測定(ding)前(qian)務必取(qu) 2-3 個預期(qi)差異較大(da)的(de)樣本做預測定(ding)測定(ding)意(yi)義：

果(guo)膠是(shi)構(gou)成(cheng)細(xi)胞(bao)初生壁和(he)中膠層(ceng)的主要成(cheng)分(fen)，主要由原果(guo)膠、果(guo)膠酸(suan)甲(jia)酯(zhi)和(he)果(guo)膠酸(suan)組(zu)成(cheng)。果(guo)膠中含(han)有(you)半(ban)乳糖醛酸(suan)、乳糖、阿拉(la)伯糖、葡(pu)萄(tao)糖醛酸(suan)等(deng)，是(shi)許(xu)多(duo)高等植物(wu)細胞(bao)壁中(zhong)含量(liang)最feng富的(de)多(duo)糖成(cheng)分(fen)，其(qi)獨te的物(wu)理、化學性質影(ying)響著(zhe)植物(wu)源食(shi)品(pin)的(de)口(kou)感和(he)品(pin)質。果(guo)膠間以Ca²⁺橋及(ji)其(qi)他(ta)離子(zi)鍵(jian)、氫(qing)鍵(jian)、糖苷鍵(jian)、酯(zhi)鍵(jian)和(he)苯(ben)環偶(ou)聯的方式交聯，通過(guo)不(bu)同(tong)的(de)抽提方法(fa)可以提取各種形(xing)式(shi)的(de)果(guo)膠，如水(shui)溶性果(guo)膠（WSP）、離子(zi)結(jie)合(he)型果(guo)膠（ISP）和(he)共(gong)價(jia)結(jie)合果(guo)膠（CSP）。

測定(ding)原理：

利用帶(dai)有螯(ao)合劑(ji)的(de)堿溶液提取共(gong)價(jia)結(jie)合型果(guo)膠（CSP），采用哢唑比色(se)法(fa)測定(ding)果(guo)膠含量(liang)。果(guo)膠水(shui)解(jie)成(cheng)半(ban)乳糖醛酸(suan)，在(zai)硫(liu)酸(suan)溶液中(zhong)與哢唑試(shi)劑(ji)進行(xing)縮合反應，生成(cheng)物(wu)質在 530 nm 處有最大(da)吸(xi)收(shou)峰(feng)。

試(shi)劑(ji)的(de)組(zu)成(cheng)和(he)配制：

需自備(bei)儀(yi)器和(he)用品(pin)：

可見分(fen)光光(guang)度計/酶標(biao)儀(yi)、水(shui)浴鍋、可調式(shi)移(yi)液器(qi)、微(wei)量(liang)石(shi)英比色(se)皿(min)/96 孔板、80％乙醇(chun)、丙(bing)酮(tong)、濃(nong)硫(liu)酸(suan)（不(bu)允(yun)許(xu)快(kuai)遞）、研缽和(he)蒸餾水(shui)

樣品(pin)的(de)前(qian)處(chu)理：

1、細胞壁(bi)的(de)提取：取約(yue) 0.3g 樣本，加入 1ml 80％乙(yi)醇，室溫快(kuai)速(su)勻(yun)漿，95℃水(shui)浴 20min，冷卻(que)至(zhi)室溫，4000g 25℃離(li)心 10min，棄(qi)上清。沈(chen)澱(dian)加入 1.5ml80％乙(yi)醇和(he)丙酮各洗壹遍(bian)（渦(wo)旋振(zhen)蕩(dang) 2min 左右，4000g 25℃離(li)心 10min，棄(qi)上清即(ji)可），沈(chen)澱(dian)即(ji)為粗細(xi)胞(bao)壁(bi)，加入 1ml 試(shi)劑(ji)壹(yi)（去(qu)除(chu)澱(dian)粉）浸泡(pao) 15 小時(shi)，4000g   25℃離(li)心 10min，棄(qi)上清，將沈(chen)澱(dian)幹燥(zao)，稱重得(de)細(xi)胞(bao)壁物(wu)質（CWM）。

2、CSP 的提取：稱取(qu)烘幹的(de)CWM 3mg，加入 1ml 試(shi)劑(ji)二(er)，充分勻漿(若(ruo)烘幹物(wu)質質地(di)堅硬，可先研碎後再(zai)加入 1ml 試(shi)劑(ji)二(er)勻(yun)漿，或(huo)者用勻漿(jiang)器勻漿(jiang))。8000g 4℃離心 10min，取上清液待(dai)測。

測定(ding)步驟(zhou)：

1、分光光(guang)度計或(huo)酶標(biao)儀(yi)預熱 30min 以上，調節(jie)波(bo)長(chang)至(zhi) 530nm 處，蒸餾(liu)水(shui)調零；試(shi)劑(ji)三(san)和(he)試(shi)劑(ji)四(si) 37℃預熱 10min上。

2、操作表

混勻

混勻，95℃水(shui)浴 5min 後，冷卻(que)至(zhi)室溫，取(qu) 200µl 至(zhi)微量(liang)石(shi)英比色(se)皿(min)或(huo) 96 孔板中，530nm 處(chu)讀(du)取(qu)吸(xi)光(guang)值(zhi)，空白(bai)管、標準(zhun)管、對(dui)照(zhao)管和(he)測定(ding)管吸光(guang)值(zhi)分別記為 A1、A2、A3 和(he)A4。若A 大(da)於(yu) 2，需將待(dai)測樣本用蒸餾(liu)水(shui)稀(xi)釋(shi)（可稀(xi)釋(shi) 10 倍(bei)或(huo) 20 倍(bei)）。空白(bai)管和(he)標準(zhun)管只要做壹管，每個測定(ding)管需設(she)壹個對(dui)照(zhao)管。

註意(yi)事(shi)項：

最di檢測限為 50μg /g 幹重

CSP 含量(liang)計(ji)算：

CSP 含量(liang)(mg /g 幹重)= (C 標準(zhun)×V1) ×(A4-A3)÷(A2-A1)÷(W×V1÷V2) ×稀(xi)釋(shi)倍(bei)數

=0.05×(A4-A3)÷(A2-A1)÷W×稀(xi)釋(shi)倍(bei)數

C 標準(zhun)：標準(zhun)管濃度，0.05mg/ml；V1：加入樣本體(ti)積(ji)，0.1ml；V2：加入提取液體(ti)積(ji)，1ml； W：樣本幹重，g。

共(gong)價(jia)結(jie)合型果(guo)膠CSP含量(liang)試(shi)劑(ji)