果(guo)膠(jiao)酶（pectinase）是壹(yi)類(lei)分(fen)解(jie)果膠(jiao)質酶類(lei)的(de)總稱，包括原(yuan)果膠(jiao)酶，果膠(jiao)酯(zhi)酶，多聚(ju)半乳(ru)糖(tang)醛酸(suan)酶和(he)果(guo)膠(jiao)裂解(jie)酶四大(da)類(lei)，廣(guang)泛(fan)存(cun)在(zai)於植物果實和(he)微(wei)生(sheng)物中，主(zhu)要用於食品、釀(niang)酒(jiu)、環保、醫藥、紡(fang)織及(ji)日(ri)化(hua)用(yong)品行(xing)業。
果膠(jiao)酶pectinase試劑(ji)盒(he)

果(guo)膠(jiao)酶（pectinase）試劑(ji)盒(he)說(shuo)明(ming)書(shu)

微(wei)量(liang)法(fa) 100T/48S

果(guo)膠(jiao)酶pectinase試劑(ji)盒(he)

正式測(ce)定(ding)前(qian)務必取(qu) 2-3 個(ge)預期(qi)差異較(jiao)大(da)的(de)樣本(ben)做(zuo)預(yu)測(ce)定(ding)測(ce)定(ding)意義(yi)：

果(guo)膠(jiao)酶（pectinase）是(shi)壹(yi)類(lei)分(fen)解(jie)果膠(jiao)質酶類(lei)的(de)總稱，包括原(yuan)果膠(jiao)酶，果膠(jiao)酯(zhi)酶，多聚(ju)半乳(ru)糖(tang)醛酸(suan)酶和(he)果(guo)膠(jiao)裂解(jie)酶四大(da)類(lei)，廣(guang)泛(fan)存(cun)在(zai)於植物果實和(he)微(wei)生(sheng)物中，主(zhu)要用於食品、釀(niang)酒(jiu)、環保、醫藥、紡(fang)織及(ji)日(ri)化(hua)用(yong)品(pin)行(xing)業。

測(ce)定(ding)原(yuan)理：

果(guo)膠(jiao)酶水解(jie)果膠(jiao)生(sheng)成(cheng)半乳(ru)糖(tang)醛酸(suan)，具有還(hai)原(yuan)性醛基(ji)，與(yu) DNS 試劑(ji)反(fan)應生(sheng)成(cheng)紅(hong)棕色(se)物質，在(zai) 540nm 有特(te)征(zheng)吸收峰，測(ce)定(ding) 540nm 處(chu)吸光(guang)值變(bian)化可計(ji)算得(de)果(guo)膠(jiao)酶活性。

試劑(ji)組(zu)成(cheng)和(he)配制：

試劑(ji)二(er)：粉劑(ji)×2 瓶(ping)，4℃保(bao)存(cun)；臨(lin)用(yong)前(qian)加(jia)入 7.5ml 試劑(ji)壹(yi)，50℃加(jia)熱溶(rong)解(jie)，用不(bu)完(wan)的(de)試劑(ji) 4℃保(bao)存(cun)壹(yi)周(zhou)。

需(xu)自(zi)備(bei)儀器(qi)和(he)用(yong)品：

天(tian)平(ping)、低溫離(li)心機、可見分(fen)光(guang)光(guang)度(du)計/酶標儀(yi)、微(wei)量(liang)石英比色皿/96 孔板(ban)、恒溫(wen)水浴鍋(guo)。

酶液提(ti)取(qu)：

1、組(zu)織：按(an)照組(zu)織質(zhi)量(liang)（g）：提(ti)取(qu)液(ye)體(ti)積(ji)(ml)為 1：5~10 的(de)比例（建議(yi)稱取約 0.1g 組(zu)織，加(jia)入 1ml 提(ti)取(qu)液(ye)），進行(xing)冰(bing)浴(yu)勻(yun)漿(jiang)。10000g 4℃離心 10min，取上(shang)清(qing)，置(zhi)冰(bing)上(shang)待(dai)測(ce)。

2、細(xi)菌(jun)、真菌(jun)：按(an)照細(xi)胞數(shu)量(liang)（104 個）：提(ti)取(qu)液(ye)體(ti)積(ji)（ml）為 500~1000：1 的(de)比例（建議(yi) 500 萬細(xi)胞加(jia)入 1ml 提(ti)取(qu)液(ye)），冰(bing)浴(yu)超聲波破碎細(xi)胞（功(gong)率 300w，超聲 3 秒，間隔(ge) 7 秒，總時間 3min）；然後 10000g， 4℃離心 10min，取上(shang)清(qing)置(zhi)於冰上(shang)待(dai)測(ce)。

3、細(xi)胞培(pei)養(yang)液等：直(zhi)接(jie)檢測(ce)。

測(ce)定(ding)步(bu)驟：

50℃水浴溫(wen)育(yu) 5min

混(hun)勻(yun)，50℃水浴反(fan)應 30min

沸(fei)水浴 5min，冰(bing)浴(yu)冷卻(que)終(zhong)止(zhi)反應，8000g，4℃，離心 10min，蒸餾(liu)水調零(ling)，取上(shang)清(qing)於微量(liang)石英比色皿或(huo) 96 孔板(ban)測(ce)定(ding) 540nm 處(chu)吸光(guang)值A，△A=A 測(ce)定(ding)管(guan)-A 對(dui)照管(guan)。每(mei)個測(ce)定(ding)管(guan)需(xu)設(she)壹(yi)個(ge)對(dui)照管(guan)。

註(zhu)意事項(xiang)：

1、試劑(ji)二(er)若有沈(chen)澱析(xi)出(chu)，請(qing)置於 50℃加(jia)熱溶(rong)解(jie)。

2、測(ce)定(ding)之(zhi)前(qian)請(qing)先做預(yu)實(shi)驗，如(ru)果(guo)吸光(guang)值較(jiao)高(gao)或(huo)較(jiao)低，請(qing)用提(ti)取(qu)液(ye)做(zuo)適(shi)當的(de)稀釋(shi)或(huo)者加(jia)大(da)樣本(ben)量(liang)，並(bing)在(zai)計算公式中乘(cheng)以稀(xi)釋(shi)倍(bei)數(shu)或(huo)者以(yi)實(shi)際(ji)加(jia)入的(de)樣本(ben)體(ti)積(ji)參(can)與(yu)計算。

煮沸樣本(ben)建議(yi)在(zai)沸水中煮沸 10 分(fen)鐘，以(yi)將酶che底(di)滅(mie)活。

酶活性計算公式：

用(yong)微(wei)量(liang)石英比色皿測(ce)定(ding)的(de)計算公式如(ru)下(xia)

標(biao)準(zhun)曲線(xian)：y = 3.9642x - 0.008；R2 = 0.9996；x 為標準(zhun)品(pin)濃度(du)，mg/ml；y 為吸光(guang)值。

按(an)照(zhao)蛋白濃度(du)計算

酶活性定義(yi)：在(zai) 50℃，pH3.5 條件(jian)下，每(mei)毫克(ke)蛋白每(mei)小(xiao)時(shi)分(fen)解(jie)果膠(jiao)產生(sheng) 1mg 半乳(ru)糖(tang)醛酸(suan)為壹(yi)個(ge)酶活力單位。

果(guo)膠(jiao)酶活性（mg/h/mg prot）= (ΔA+0.008) ÷3.9642×V 反總÷（V 樣×Cpr）÷T

= 2.523×(ΔA+0.008)÷Cpr

按(an)照(zhao)樣本(ben)質(zhi)量(liang)計算

酶活性定義(yi)：在(zai) 50℃，pH3.5 條件(jian)下，每(mei)克(ke)樣本(ben)每(mei)小(xiao)時(shi)分(fen)解(jie)果膠(jiao)產生(sheng) 1mg 半乳(ru)糖(tang)醛酸(suan)為壹(yi)個(ge)酶活力單位。

果(guo)膠(jiao)酶活性（mg/h /g 鮮(xian)重）=(ΔA+0.008) ÷3.9642×V 反(fan)總÷（V 樣×W÷V 樣總(zong)）÷T

= 2.523×(ΔA+0.008)÷W

按(an)細(xi)胞數(shu)量(liang)計算

酶活性定義(yi)：在(zai) 50℃，pH3.5 條件(jian)下，每(mei) 104 細(xi)胞每(mei)小(xiao)時(shi)分(fen)解(jie)果膠(jiao)產生(sheng) 1mg 半乳(ru)糖(tang)醛酸(suan)為壹(yi)個(ge)酶活力單位。

果(guo)膠(jiao)酶活性（mg/h /104cell）=(ΔA+0.008) ÷3.9642×V 反總÷（V 樣×細(xi)胞數(shu)量(liang)÷V 樣總(zong)）÷T

= 2.523×(ΔA+0.008)÷細(xi)胞數(shu)量(liang)

細(xi)胞培(pei)養(yang)液

酶活性定義(yi)：在(zai) 50℃，pH3.5 條件(jian)下，每(mei)毫升(sheng)培(pei)養(yang)液每(mei)小(xiao)時(shi)分(fen)解(jie)果膠(jiao)產生(sheng) 1mg 半乳(ru)糖(tang)醛酸(suan)為壹(yi)個(ge)酶活力單位。

果(guo)膠(jiao)酶活性（mg/h /ml）=(ΔA+0.008) ÷3.9642×V 反總÷V 樣÷T=2.523×(ΔA+0.008)

V 反(fan)總(zong)：反應總體(ti)積(ji)，0.15ml；V 樣：反(fan)應中樣本(ben)體(ti)積(ji)，0.03ml；V 樣總(zong)：加(jia)入提(ti)取(qu)液(ye)體(ti)積(ji)，1ml；Cpr：樣本(ben)蛋白濃度(du)，mg/ml；W，樣本(ben)質(zhi)量(liang)，g；T：反應時間(jian)，0.5h

用(yong) 96 孔(kong)板(ban)測(ce)定(ding)的(de)計算公式如(ru)下(xia)

標(biao)準(zhun)曲線(xian)：y = 1.9821x - 0.008，R2 = 0.9996；x 為標準(zhun)品(pin)濃度(du)，mg/ml；y 為吸光(guang)值。

按(an)照(zhao)蛋白濃度(du)計算

酶活性定義(yi)：在(zai) 50℃，pH3.5 條件(jian)下，每(mei)毫克(ke)蛋白每(mei)小(xiao)時(shi)分(fen)解(jie)果膠(jiao)產。生(sheng) 1mg 半乳(ru)糖(tang)醛酸(suan)為壹(yi)個(ge)酶活力單位。

果(guo)膠(jiao)酶活性（mg/h/mg prot）=(ΔA+0.008) ÷1.9821×V 反總÷（V 樣×Cpr）÷T

= 5.045×(ΔA+0.008)÷Cpr

按(an)照(zhao)樣本(ben)質(zhi)量(liang)計算

酶活性定義(yi)：在(zai) 50℃，pH3.5 條件(jian)下，每(mei)克(ke)樣本(ben)每(mei)小(xiao)時(shi)分(fen)解(jie)果膠(jiao)產生(sheng) 1mg 半乳(ru)糖(tang)醛酸(suan)為壹(yi)個(ge)酶活力單位。

果(guo)膠(jiao)酶活性（mg/h/g 鮮(xian)重）=(ΔA+0.008) ÷1.9821×V 反(fan)總÷（V 樣×W÷V 樣總(zong)）÷T

= 5.045×(ΔA+0.008)÷W

按(an)細(xi)胞數(shu)量(liang)計算

酶活性定義(yi)：在(zai) 50℃，pH3.5 條件(jian)下，每(mei) 104 細(xi)胞每(mei)小(xiao)時(shi)分(fen)解(jie)果膠(jiao)產生(sheng) 1mg 半乳(ru)糖(tang)醛酸(suan)為壹(yi)個(ge)酶活力單位。

果(guo)膠(jiao)酶活性（mg/h /104cell）=(ΔA+0.008) ÷1.9821×V 反總÷（V 樣×細(xi)胞數(shu)量(liang)÷V 樣總(zong)）÷T

= 5.045×(ΔA+0.008)÷細(xi)胞數(shu)量(liang)

細(xi)胞培(pei)養(yang)液

酶活性定義(yi)：在(zai) 50℃，pH3.5 條件(jian)下，每(mei)毫升(sheng)培(pei)養(yang)液每(mei)小(xiao)時(shi)分(fen)解(jie)果膠(jiao)產生(sheng) 1mg 半乳(ru)糖(tang)醛酸(suan)為壹(yi)個(ge)酶活力單位。

果(guo)膠(jiao)酶活性（mg/h/ml）=(ΔA+0.008) ÷1.9821×V 反總÷V 樣÷T=5.045×(ΔA+0.008)

V 反(fan)總(zong)：反應總體(ti)積(ji)，0.15ml；V 樣：反(fan)應中樣本(ben)體(ti)積(ji)，0.03ml；V 樣總(zong)：加(jia)入提(ti)取(qu)液(ye)體(ti)積(ji)，1ml；Cpr：樣本(ben)蛋白濃度(du)，mg/ml；W，樣本(ben)質(zhi)量(liang)，g；T：反應時間(jian)，0.5h

果(guo)膠(jiao)酶pectinase試劑(ji)盒(he)