果(guo)膠(jiao)裂解(jie)酶（EC4.2.2.10）是(shi)果(guo)膠(jiao)酶的(de)重要(yao)組成(cheng)部分(fen)，是(shi)壹種能(neng)降解(jie)植(zhi)物(wu)細胞(bao)壁(bi)，導(dao)致植物(wu)組(zu)織(zhi)軟化(hua)甚(shen)至死亡(wang)的解(jie)聚(ju)酶，來(lai)源(yuan)比較(jiao)廣泛(fan)，主要(yao)來源(yuan)於微生(sheng)物(wu)，可用(yong)於果(guo)汁(zhi)、果(guo)酒(jiu)的(de)澄清(qing)，提(ti)高(gao)水(shui)果(guo)出(chu)汁率(lv)，植(zhi)物(wu)病(bing)毒的(de)純(chun)化，紙漿(jiang)的(de)漂(piao)白(bai)和(he)紡織(zhi)品的(de)生物精(jing)煉(lian)，在減(jian)少(shao)環(huan)境(jing)汙染(ran)和(he)降低(di)能(neng)源(yuan)消(xiao)耗(hao)方(fang)面(mian)具(ju)有潛在的應(ying)用(yong)價(jia)值(zhi)。
果(guo)膠(jiao)裂解(jie)酶試(shi)劑(ji)盒 果(guo)膠(jiao)系(xi)列

果(guo)膠(jiao)裂解(jie)酶（pectinate lyases，PL）試(shi)劑(ji)盒說(shuo)明(ming)書(shu)

微量(liang)法 100T/48S

果(guo)膠(jiao)裂解(jie)酶試(shi)劑(ji)盒 果(guo)膠(jiao)系(xi)列

正(zheng)式(shi)測定前(qian)務(wu)必取(qu) 2-3 個預(yu)期差(cha)異較(jiao)大(da)的樣(yang)本做預測定測定意(yi)義(yi)：

果(guo)膠(jiao)裂解(jie)酶（EC4.2.2.10）是(shi)果(guo)膠(jiao)酶的(de)重要(yao)組成(cheng)部分(fen)，是(shi)壹種能(neng)降解(jie)植(zhi)物(wu)細胞(bao)壁(bi)，導(dao)致植物(wu)組(zu)織(zhi)軟化(hua)甚(shen)至死亡(wang)的解(jie)聚(ju)酶，來(lai)源(yuan)比較(jiao)廣泛(fan)，主要(yao)來源(yuan)於微生(sheng)物(wu)，可用(yong)於果(guo)汁(zhi)、果(guo)酒(jiu)的(de)澄清(qing)，提(ti)高(gao)水(shui)果(guo)出(chu)汁率(lv)，植(zhi)物(wu)病(bing)毒的(de)純(chun)化，紙漿(jiang)的(de)漂(piao)白(bai)和(he)紡織(zhi)品的(de)生物精(jing)煉(lian)，在減(jian)少(shao)環(huan)境(jing)汙染(ran)和(he)降低(di)能(neng)源(yuan)消(xiao)耗(hao)方(fang)面(mian)具(ju)有潛在的應(ying)用(yong)價(jia)值(zhi)。

測定原(yuan)理：

果(guo)膠(jiao)裂解(jie)酶作用(yong)於果(guo)膠(jiao)中(zhong)的α-1,4 糖(tang)苷鍵(jian)，生成(cheng)在(zai)還(hai)原端C4 和(he)C5 之間(jian)位置(zhi)具(ju)有不飽和(he)鍵的(de)不飽和(he)寡(gua)聚(ju)半乳糖(tang)醛酸，在(zai) 235nm 處(chu)有特征吸(xi)收(shou)峰。

組(zu)成(cheng)：

自(zi)備(bei)儀器(qi)和(he)用(yong)品：

天平(ping)、低(di)溫(wen)離(li)心(xin)機、紫(zi)外分光(guang)光度(du)計(ji)/酶標(biao)儀(yi)、微量(liang)石(shi)英(ying)比色(se)皿/96 孔板（UV 板）、恒溫(wen)水(shui)浴鍋。

酶液(ye)提(ti)取(qu)：

1、組(zu)織(zhi)：按(an)照組(zu)織(zhi)質(zhi)量(liang)（g）：提(ti)取(qu)液(ye)體(ti)積(ji)(ml)為(wei) 1：5~10 的比例(li)（建(jian)議(yi)稱取(qu)約(yue) 0.1g 組(zu)織(zhi)，加(jia)入 1ml提(ti)取(qu)液(ye)），進行(xing)冰浴勻(yun)漿(jiang)。10000g ，4℃離(li)心(xin) 10min，取(qu)上清(qing)，置(zhi)冰上待(dai)測。

2、細菌(jun)、真菌(jun)：按(an)照細胞(bao)數量(liang)（104 個）：提(ti)取(qu)液(ye)體(ti)積(ji)（ml）為(wei) 500~1000：1 的比例(li)（建(jian)議(yi) 500 萬細胞(bao)加(jia)入 1ml 提(ti)取(qu)液(ye)），冰浴超聲(sheng)波破(po)碎細胞(bao)（功率(lv) 300w，超(chao)聲(sheng) 3 秒(miao)，間(jian)隔 7 秒(miao)，總時(shi)間(jian) 3min）；然後(hou) 10000g， 4℃，離(li)心(xin) 10min，取(qu)上清(qing)置(zhi)於(yu)冰上待(dai)測。

3、培(pei)養液(ye)：直(zhi)接(jie)測定。

測定步驟：

1、分(fen)光光度計/酶標(biao)儀(yi)預(yu)熱 30min，調(tiao)節波(bo)長至 235nm，蒸(zheng)餾水(shui)調零。

2、操作表(biao)：

酶活(huo)性(xing)計(ji)算公式(shi)：

用(yong)微量(liang)石(shi)英(ying)比色(se)皿測定的(de)計算(suan)公式(shi)如下(xia)

組(zu)織(zhi)中(zhong)PL 活(huo)性(xing)

按(an)照蛋(dan)白濃度計(ji)算(suan)

酶活(huo)性(xing)定(ding)義(yi)：在(zai) 40℃，pH5.5 條(tiao)件(jian)下(xia)，每毫(hao)克(ke)蛋(dan)白(bai)每分鐘(zhong)分解(jie)果(guo)膠(jiao)產(chan)生 1nmol 不(bu)飽和(he)半乳糖(tang)醛酸所(suo)需的(de)酶量(liang)為壹個酶活(huo)力(li)單位。

PL 活(huo)性(xing)（nmol/min/mg prot）= △A÷（ε×d）×V 反(fan)總÷（V 樣(yang)×Cpr）÷T

= 64.1×△A÷Cpr

按(an)照樣(yang)本質量(liang)計算

酶活(huo)性(xing)定(ding)義(yi)：在(zai) 40℃，pH5.5 條(tiao)件(jian)下(xia)，每克(ke)組(zu)織(zhi)每(mei)分(fen)鐘(zhong)分解(jie)果(guo)膠(jiao)產(chan)生 1nmol 不(bu)飽和(he)半乳糖(tang)醛酸所(suo)需的(de)酶量(liang)為壹個酶活(huo)力(li)單位。

PL 活(huo)性(xing)（nmol/min/g 鮮重）= △A÷（ε×d）×V 反(fan)總÷（V 樣(yang)×W÷V 樣(yang)總）÷T

= 64.1×△A÷W

細菌(jun)、真菌(jun)PL 活性(xing)

酶活(huo)性(xing)定(ding)義(yi)：在(zai) 40℃，pH5.5 條(tiao)件(jian)下(xia)，每 104 個(ge)細胞(bao)每分(fen)鐘分(fen)解(jie)果(guo)膠(jiao)產(chan)生 1nmol 不(bu)飽和(he)半乳糖(tang)醛酸所(suo)需的(de)酶量(liang)為壹個酶活(huo)力(li)單位。

PL 活(huo)性(xing)（nmol/min/104cell）= △A ÷（ε×d）×V 反(fan)總÷（V 樣(yang)×細胞(bao)數量(liang)÷V 樣(yang)總）÷T

= 64.1×△A÷細胞(bao)數量(liang)

培(pei)養液(ye)PL 活(huo)性(xing)

酶活(huo)性(xing)定(ding)義(yi)：在(zai) 40℃，pH5.5 條(tiao)件(jian)下(xia)，每毫(hao)升(sheng)培(pei)養液(ye)每(mei)分(fen)鐘分解(jie)果(guo)膠(jiao)產(chan)生 1nmol 不(bu)飽和(he)半乳糖(tang)醛酸所(suo)需的(de)酶量(liang)為壹個酶活(huo)力(li)單位。

PL 活(huo)性(xing)（nmol/min/ml）= △A÷（ε×d）×V 反(fan)總÷V 樣(yang)÷T

= 64.1×△A

ε：不(bu)飽和(he)半乳糖(tang)醛酸摩(mo)爾(er)消(xiao)光(guang)系(xi)數：5200L/mol/cm；d：比色皿光(guang)徑(jing)，1cm；V 反(fan)總：反(fan)應(ying)總(zong)體(ti)積(ji)， 0.2ml；V 樣(yang)：反(fan)應(ying)體(ti)系(xi)中(zhong)樣(yang)本體(ti)積(ji)，0.02ml；V 樣(yang)總：加(jia)入提(ti)取(qu)液(ye)體(ti)積(ji)，1ml；Cpr：樣(yang)本蛋白濃度，mg/ml； W，樣(yang)本質量(liang)，g；T：反(fan)應(ying)時(shi)間(jian)，30min

用(yong) 96 孔板測定的(de)計算(suan)公式(shi)如下(xia)

組(zu)織(zhi)中(zhong)PL 活(huo)性(xing)

按(an)照蛋(dan)白濃度計(ji)算(suan)

酶活(huo)性(xing)定(ding)義(yi)：在(zai) 40℃，pH5.5 條(tiao)件(jian)下(xia)，每毫(hao)克(ke)蛋(dan)白(bai)每分鐘(zhong)分解(jie)果(guo)膠(jiao)產(chan)生 1nmol 不(bu)飽和(he)半乳糖(tang)醛酸所(suo)需的(de)酶量(liang)為壹個酶活(huo)力(li)單位。

PL 活(huo)性(xing)（nmol/min/mg prot）= △A÷（ε×d）×V 反(fan)總÷（V 樣(yang)×Cpr）÷T

= 128.2×△A÷Cpr

按(an)照樣(yang)本質量(liang)計算

酶活(huo)性(xing)定(ding)義(yi)：在(zai) 40℃，pH5.5 條(tiao)件(jian)下(xia)，每克(ke)組(zu)織(zhi)每(mei)分(fen)鐘(zhong)分解(jie)果(guo)膠(jiao)產(chan)生 1nmol 不(bu)飽和(he)半乳糖(tang)醛酸所(suo)需的(de)酶量(liang)為壹個酶活(huo)力(li)單位。

PL 活(huo)性(xing)（nmol/min/g 鮮重）= △A÷（ε×d）×V 反(fan)總÷（V 樣(yang)×W÷V 樣(yang)總）÷T

= 128.2×△A÷W

細菌(jun)、真菌(jun)PL 活性(xing)

酶活(huo)性(xing)定(ding)義(yi)：在(zai) 40℃，pH5.5 條(tiao)件(jian)下(xia)，每 104 個(ge)細胞(bao)每分(fen)鐘分(fen)解(jie)果(guo)膠(jiao)產(chan)生 1nmol 不(bu)飽和(he)半乳糖(tang)醛酸所(suo)需的(de)酶量(liang)為壹個酶活(huo)力(li)單位。

PL 活(huo)性(xing)（nmol/min/104cell）=△A÷（ε×d）×V 反(fan)總÷（V 樣(yang)×細胞(bao)數量(liang)÷V 樣(yang)總）÷T

= 128.2×△A÷細胞(bao)數量(liang)

培(pei)養液(ye)PL 活(huo)性(xing)

酶活(huo)性(xing)定(ding)義(yi)：在(zai) 40℃，pH5.5 條(tiao)件(jian)下(xia)，每毫(hao)升(sheng)培(pei)養液(ye)每(mei)分(fen)鐘分解(jie)果(guo)膠(jiao)產(chan)生 1nmol 不(bu)飽和(he)半乳糖(tang)醛酸所(suo)需的(de)酶量(liang)為壹個酶活(huo)力(li)單位。

PL 活(huo)性(xing)（nmol/min//ml）= △A÷（ε×d）×V 反(fan)總÷V 樣(yang)÷T

= 128.2×△A

ε：不(bu)飽和(he)半乳糖(tang)醛酸摩(mo)爾(er)消(xiao)光(guang)系(xi)數：5200L/mol/cm；d：比色皿光(guang)徑(jing)，0.5cm；V 反(fan)總：反(fan)應(ying)總(zong)體(ti)積(ji)， 0.2ml；V 樣(yang)：反(fan)應(ying)體(ti)系(xi)中(zhong)樣(yang)本體(ti)積(ji)，0.02ml；V 樣(yang)總：加(jia)入提(ti)取(qu)液(ye)體(ti)積(ji)，1ml；Cpr：樣(yang)本蛋白濃度，mg/ml； W，樣(yang)本質量(liang)，g；T：反(fan)應(ying)時(shi)間(jian)，30min。

果(guo)膠(jiao)裂解(jie)酶試(shi)劑(ji)盒 果(guo)膠(jiao)系(xi)列