多聚(ju)半(ban)乳糖醛(quan)酸酶(mei)（EC3.2.1.15）是(shi)壹(yi)種細胞(bao)壁(bi)結(jie)合(he)蛋白(bai)，可(ke)以(yi)催化果膠分子(zi)中α-(1,4)-聚半(ban)乳糖醛(quan)酸的裂(lie)解，參與果膠的降(jiang)解，使細胞(bao)壁(bi)結(jie)構解體，導致果實(shi)軟(ruan)化，與果實(shi)成(cheng)熟(shu)、葉(ye)和(he)花的脫落、病原(yuan)物防禦(yu)，細胞(bao)伸展發育(yu)以(yi)及(ji)木(mu)質化有(you)關，在(zai)植(zhi)物(wu)抗病性和食(shi)品(pin)貯藏(zang)保鮮(xian)領域具(ju)有(you)較(jiao)高(gao)的研究價值。
多聚半乳糖醛(quan)酸酶(mei)試(shi)劑(ji)盒(he) 果膠系列(lie)

多(duo)聚(ju)半(ban)乳糖醛(quan)酸酶(mei)（ploygalacturonase，PG）試(shi)劑(ji)盒(he)說明(ming)書

微(wei)量(liang)法 100T/48S

多(duo)聚(ju)半(ban)乳糖醛(quan)酸酶(mei)試(shi)劑(ji)盒(he) 果膠系列(lie)

正(zheng)式(shi)測(ce)定(ding)前務必取 2-3 個(ge)預期(qi)差異較(jiao)大的樣本做(zuo)預測(ce)定(ding)測(ce)定(ding)意義(yi)：

多(duo)聚(ju)半(ban)乳糖醛(quan)酸酶(mei)（EC3.2.1.15）是(shi)壹(yi)種細胞(bao)壁(bi)結(jie)合(he)蛋白(bai)，可(ke)以(yi)催化果膠分子(zi)中α-(1,4)-聚半(ban)乳糖醛(quan)酸的裂(lie)解，參與果膠的降(jiang)解，使細胞(bao)壁(bi)結(jie)構解體，導致果實(shi)軟(ruan)化，與果實(shi)成(cheng)熟(shu)、葉(ye)和(he)花的脫落、病原(yuan)物防禦(yu)，細胞(bao)伸展發育(yu)以(yi)及(ji)木(mu)質化有(you)關，在(zai)植(zhi)物(wu)抗病性和食(shi)品(pin)貯藏(zang)保鮮(xian)領域具(ju)有(you)較(jiao)高(gao)的研究價值。

測(ce)定(ding)原(yuan)理：

多(duo)聚(ju)半(ban)乳糖醛(quan)酸酶(mei)水(shui)解果膠酸生(sheng)成(cheng)半(ban)乳糖醛(quan)酸，具(ju)有(you)還(hai)原(yuan)性醛(quan)基(ji)，與DNS 試(shi)劑(ji)反(fan)應(ying)生(sheng)成(cheng)紅(hong)棕(zong)色(se)物質，在(zai) 540nm 有(you)特(te)征(zheng)吸收峰(feng)，測(ce)定(ding) 540nm 處吸光值變化可(ke)計(ji)算得(de)多(duo)聚(ju)半(ban)乳(ru)糖醛(quan)酸酶(mei)活性。

組成(cheng)：

自(zi)備儀(yi)器和(he)用(yong)品(pin)：

天(tian)平(ping)、低(di)溫離(li)心(xin)機(ji)、可(ke)見(jian)分光光度(du)計/酶(mei)標(biao)儀(yi)、微(wei)量(liang)石英(ying)比色(se)皿(min)/96 孔板(ban)、恒溫水浴(yu)鍋。

酶(mei)液(ye)提取：

組織(zhi)：按照(zhao)組織(zhi)質量(liang)（g）：提(ti)取液(ye)體積(ml)為(wei) 1：5~10 的比例(li)（建(jian)議(yi)稱(cheng)取(qu)約(yue) 0.1g 組織(zhi)，加入(ru) 1ml提(ti)取(qu)液(ye)），進行(xing)冰(bing)浴(yu)勻(yun)漿。16000g 4℃離(li)心(xin) 10min，取上(shang)清(qing)，置(zhi)冰上(shang)待(dai)測(ce)。

細菌(jun)、真菌(jun)：按照(zhao)細胞(bao)數量(liang)（104 個(ge)）：提取(qu)液體積（ml）為(wei) 500~1000：1 的比例(li)（建(jian)議(yi) 500 萬(wan)細胞(bao)加入(ru) 1ml 提(ti)取(qu)液(ye)），冰(bing)浴(yu)超聲波破(po)碎細胞(bao)（功(gong)率 300w，超聲 3 秒，間隔 7 秒，總(zong)時間 3min）；然後 16000g， 4℃離心(xin) 10min，取上(shang)清(qing)置(zhi)於冰上(shang)待(dai)測(ce)。

培養(yang)液(ye)：直(zhi)接(jie)檢測(ce)。

測(ce)定(ding)操作(zuo)表(biao)：

註(zhu)意(yi)事(shi)項：

煮(zhu)沸樣本建(jian)議(yi)將樣(yang)本(ben)在(zai)沸(fei)水(shui)中煮(zhu)沸 10 分(fen)鐘(zhong)，以(yi)將酶(mei)徹(che)di滅(mie)活。

酶(mei)活性計算(suan)公式(shi)：

用(yong)微(wei)量(liang)石英(ying)比色(se)皿(min)測(ce)定(ding)的計算公式(shi)如(ru)下

標(biao)準(zhun)曲線(xian)：y = 3.9642x - 0.008；R2 = 0.9996；x 為(wei)標(biao)準(zhun)品(pin)濃度(du)，mg/ml；y 為(wei)吸(xi)光值。

按照(zhao)蛋(dan)白(bai)濃度(du)計算(suan)

酶(mei)活性定(ding)義(yi)：在(zai) 40℃，pH6.0 條(tiao)件(jian)下，每毫克(ke)蛋白(bai)每小(xiao)時分解果膠酸產生(sheng) 1mg 半(ban)乳(ru)糖醛(quan)酸為(wei)壹(yi)個酶(mei)活力(li)單(dan)位。

PG 活性（mg/h/mg prot）= (ΔA+0.008) ÷3.9642×V 反(fan)總(zong)÷（V 樣×Cpr）÷T

= 2.523×(ΔA+0.008)÷Cpr

按照(zhao)樣(yang)本(ben)質量(liang)計(ji)算

酶(mei)活性定(ding)義(yi)：在(zai) 40℃，pH6.0 條(tiao)件(jian)下，每克樣本每(mei)小時分解果膠酸產生(sheng) 1mg 半(ban)乳(ru)糖醛(quan)酸為(wei)壹(yi)個酶(mei)活力(li)單(dan)位。

PG 活性（mg/h/g 鮮重(zhong)）=(ΔA+0.008) ÷3.9642×V 反(fan)總(zong)÷（V 樣×W÷V 樣總(zong)）÷T

= 2.523×(ΔA+0.008)÷W

按液(ye)體(ti)體(ti)積(ji)計算

酶(mei)活性定(ding)義(yi)：在(zai) 40℃，pH6.0 條(tiao)件(jian)下，每毫升(sheng)培養(yang)液(ye)每(mei)小(xiao)時分解果膠酸產生(sheng) 1mg 半(ban)乳(ru)糖醛(quan)酸為(wei)壹(yi)個酶(mei)活力(li)單(dan)位。

PG 活性（mg/h/ml）=(ΔA+0.008) ÷3.9642×V 反(fan)總(zong)÷V 樣÷T=2.523×(ΔA+0.008)

按細胞(bao)數量(liang)計(ji)算

酶(mei)活性定(ding)義(yi)：在(zai) 40℃，pH6.0 條(tiao)件(jian)下，每 104 個(ge)細胞(bao)每(mei)小時分解果膠酸產生(sheng) 1mg 半(ban)乳(ru)糖醛(quan)酸為(wei)壹(yi)個酶(mei)活力(li)單(dan)位。

PG 活性（mg/h/104cell）=(ΔA+0.008) ÷3.9642×V 反(fan)總(zong)÷（V 樣×細胞(bao)數量(liang)÷V 樣(yang)總(zong)）÷T

= 2.523×(ΔA+0.008)÷細胞(bao)數量(liang)

V 反(fan)總(zong)：反應(ying)總(zong)體積，0.15ml；V 樣(yang)：反(fan)應(ying)中樣本(ben)體積(ji)，0.03ml；V 樣總(zong)：加入(ru)提(ti)取(qu)液(ye)體(ti)積，1ml；Cpr：樣本蛋(dan)白(bai)濃度(du)，mg/ml；W，樣本(ben)質量(liang)，g；T：反(fan)應(ying)時間，0.5h。

用(yong) 96 孔板(ban)測(ce)定(ding)的計算公式(shi)如(ru)下

標(biao)準(zhun)曲線(xian)：y = 1.9821x - 0.008，R2 = 0.9996；x 為(wei)標(biao)準(zhun)品(pin)濃度(du)，mg/ml；y 為(wei)吸(xi)光值。

按照(zhao)蛋(dan)白(bai)濃度(du)計算(suan)

酶(mei)活性定(ding)義(yi)：在(zai) 40℃，pH6.0 條(tiao)件(jian)下，每毫克(ke)蛋白(bai)每小(xiao)時分解果膠酸產生(sheng) 1mg 半(ban)乳(ru)糖醛(quan)酸為(wei)壹(yi)個酶(mei)活力(li)單(dan)位。

PG 活性（mg/h/mg prot）=(ΔA+0.008) ÷1.9821×V 反(fan)總(zong)÷（V 樣×Cpr）÷T

= 5.045×(ΔA+0.008)÷Cpr

按照(zhao)樣(yang)本(ben)質量(liang)計(ji)算

酶(mei)活性定(ding)義(yi)：在(zai) 40℃，pH6.0 條(tiao)件(jian)下，每克樣本每(mei)小時分解果膠酸產生(sheng) 1mg 半(ban)乳(ru)糖醛(quan)酸為(wei)壹(yi)個酶(mei)活力(li)單(dan)位（U）。

PG 活性（mg/h/g 鮮重(zhong)）=(ΔA+0.008) ÷1.9821×V 反(fan)總(zong)÷（V 樣×W÷V 樣總(zong)）÷T

= 5.045×(ΔA+0.008)÷W

按液(ye)體(ti)體(ti)積(ji)計算

酶(mei)活性定(ding)義(yi)：在(zai) 40℃，pH6.0 條(tiao)件(jian)下，每毫升(sheng)培養(yang)液(ye)每(mei)小(xiao)時分解果膠酸產生(sheng) 1mg 半(ban)乳(ru)糖醛(quan)酸為(wei)壹(yi)個酶(mei)活力(li)單(dan)位（U）。

PG 活性（mg/h/ml）=(ΔA+0.008) ÷1.9821×V 反(fan)總(zong)÷V 樣÷T=5.045×(ΔA+0.008)

按細胞(bao)數量(liang)計(ji)算

酶(mei)活性定(ding)義(yi)：在(zai) 40℃，pH6.0 條(tiao)件(jian)下，每 104 個(ge)細胞(bao)每(mei)小時分解果膠酸產生(sheng) 1mg 半(ban)乳(ru)糖醛(quan)酸為(wei)壹(yi)個酶(mei)活力(li)單(dan)位（U）。

PG 活性（mg/h/104cell）=(ΔA+0.008) ÷1.9821×V 反(fan)總(zong)÷（V 樣×細胞(bao)數量(liang)÷V 樣(yang)總(zong)）÷T

= 5.045×(ΔA+0.008)÷細胞(bao)數量(liang)

V 反(fan)總(zong)：反應(ying)總(zong)體積，0.15ml；V 樣(yang)：反(fan)應(ying)中樣本(ben)體積(ji)，0.03ml；V 樣總(zong)：加入(ru)提(ti)取(qu)液(ye)體(ti)積，1ml；Cpr：樣本蛋(dan)白(bai)濃度(du)，mg/ml；W，樣本(ben)質量(liang)，g；T：反(fan)應(ying)時間，0.5h。

多(duo)聚(ju)半(ban)乳糖醛(quan)酸酶(mei)試(shi)劑(ji)盒(he) 果膠系列(lie)