果糖(tang)-1,6 二磷酸酶又(you)稱(cheng)果(guo)糖(tang) 1,6 二磷(lin)酸酯(zhi)酶，催(cui)化 1,6 二(er)磷(lin)酸(suan)果(guo)糖(tang)和(he)水(shui)生成 6 磷(lin)酸(suan)果糖(tang)和無機(ji)磷(lin)，在(zai)糖(tang)的異生代(dai)謝和光(guang)合作(zuo)用(yong)同化物蔗(zhe)糖的合成中起(qi)關(guan)鍵性的作(zuo)用(yong)。
果糖-1,6-二磷酸(suan)酶試(shi)劑(ji)盒光(guang)合系(xi)列(lie)

果糖-1,6-二磷(lin)酸酶(Fructose 1,6-bisphosphatase，FBP)試(shi)劑(ji)盒說(shuo)明書(shu)

分(fen)光(guang)光(guang)度法(fa) 50 管 48 樣(yang)

果糖-1,6-二(er)磷酸酶試(shi)劑(ji)盒光(guang)合系(xi)列(lie)

正(zheng)式(shi)測定(ding)前(qian)務(wu)必(bi)取(qu) 2-3 個預期差(cha)異較(jiao)大(da)的樣(yang)本(ben)做預測(ce)定測(ce)定意(yi)義(yi)：

果糖-1,6 二磷酸酶又(you)稱(cheng)果(guo)糖(tang) 1,6 二磷酸酯(zhi)酶，催(cui)化 1,6 二磷酸果(guo)糖和水生成 6 磷酸果糖(tang)和無機(ji)磷(lin)，在(zai)糖(tang)的異生代(dai)謝和光(guang)合作(zuo)用(yong)同化物蔗(zhe)糖的合成中起(qi)關(guan)鍵性的作(zuo)用(yong)。

測定原理(li)：

FBP 催(cui)化 1,6 二磷酸果(guo)糖和水生成 6 磷酸果糖(tang)和無機(ji)磷(lin)，在(zai)反(fan)應體系(xi)中添(tian)加的磷酸(suan)葡(pu)萄糖(tang)異構(gou)酶和(he) 6-磷(lin)酸(suan)葡(pu)萄糖(tang)脫(tuo)氫酶依(yi)次(ci)催(cui)化生成 6-磷(lin)酸(suan)葡(pu)萄糖(tang)酸和 NADPH，340nm 下(xia)測定(ding)NADPH 增(zeng)加(jia)速(su)率，即(ji)可(ke)計(ji)算 FBP 活性。

組(zu)成：

試(shi)劑(ji)壹：粉劑(ji)×1 瓶(ping)，-20℃保(bao)存(cun)；臨用(yong)前加入 40ml 試(shi)劑(ji)四充分(fen)溶(rong)解(jie)待(dai)用(yong)，用(yong)不完(wan)的試(shi)劑(ji) 4℃保(bao)存(cun)； 試(shi)劑(ji)二(er)：液體 18μl×1 瓶(ping)，4℃保(bao)存(cun)；臨用(yong)前加入 2.5ml 蒸餾(liu)水充分溶(rong)解(jie)待(dai)用(yong)，用(yong)不完(wan)的試(shi)劑(ji) 4℃保(bao)存(cun)；試(shi)劑(ji)三：粉劑(ji)×1 瓶(ping)，-20℃保(bao)存(cun)；臨用(yong)前加入 2.5ml 蒸餾(liu)水充分溶(rong)解(jie)待(dai)用(yong)，用(yong)不完(wan)的試(shi)劑(ji) 4℃保(bao)存(cun)；

自(zi)備(bei)儀(yi)器(qi)和(he)用(yong)品：

分(fen)光(guang)光(guang)度計(ji)、恒(heng)溫(wen)水浴鍋、臺式(shi)離(li)心機(ji)、可(ke)調(tiao)式(shi)移液器(qi)、1 ml 石(shi)英比色(se)皿、研(yan)缽(bo)、冰和蒸(zheng)餾水(shui)

樣(yang)本(ben)的前處(chu)理(li):

①總(zong)FBP 酶提(ti)取(qu)：建(jian)議(yi)稱取(qu)約 0.1g 樣(yang)本(ben)，加(jia)入(ru) 1ml 提(ti)取(qu)液壹，冰浴勻(yun)漿後(hou)超聲破(po)碎(sui)（冰浴，200W，破(po)碎(sui)

3s，間歇(xie) 7s，總(zong)時(shi)間 1min），然(ran)後(hou) 4℃，8000g 離(li)心 10min，取(qu)上清(qing)測(ce)定(ding)。

②胞漿和葉(ye)綠體FBP 酶的分離(li)：按照植(zhi)物組(zu)織(zhi)質量（g）：提(ti)取(qu)液體積(ji)(ml)為(wei) 1：5～10 的比例(li)（建(jian)議(yi)稱取(qu)約 0.1g 樣(yang)本(ben)，加(jia)入(ru) 1ml 提(ti)取(qu)液壹），冰浴勻(yun)漿後(hou)於 4℃，200g 離(li)心 5min，棄沈(chen)澱(dian)，取(qu)上清(qing)在(zai) 4℃，8000g離(li)心 10min，取(qu)上清(qing)用(yong)於測定(ding)胞漿 FBP 酶活(huo)性(xing)，取(qu)沈(chen)澱(dian)加 1ml 提(ti)取(qu)液二(er)，震蕩溶(rong)解(jie)後(hou)超聲破(po)碎(sui)（冰浴，200W，破(po)碎(sui) 3s，間歇(xie) 7s，總(zong)時(shi)間 1min），然(ran)後(hou) 4℃，8000g 離(li)心 10min，取(qu)上清(qing)測(ce)定(ding)葉(ye)綠體中FBP 酶活(huo)性(xing)。

建(jian)議(yi)測定總(zong)FBP 酶活(huo)性(xing)，按(an)照(zhao)步驟(zhou)①提(ti)取(qu)粗(cu)酶液，若(ruo)需(xu)要(yao)分別(bie)測(ce)定(ding)胞漿和葉(ye)綠體中的 FBP，則按(an)照步驟(zhou)②提(ti)取(qu)粗(cu)酶液。

測(ce)定步驟(zhou)：

1、分(fen)光(guang)光(guang)度計(ji)預熱(re) 30min 以上(shang)，調(tiao)節(jie)波長(chang)至(zhi) 340nm，蒸(zheng)餾(liu)水調(tiao)零(ling)。

2、將(jiang)試(shi)劑(ji)壹、二、三 37℃(哺乳動物)或 25℃(其它(ta)物種)預熱(re) 10 分鐘

3、加樣(yang)表(biao)：

將上(shang)述(shu)試(shi)劑(ji)按(an)順(shun)序(xu)加(jia)入 1 ml 石(shi)英比色(se)皿中，立即(ji)混(hun)勻(yun)，加(jia)入最後(hou)壹個試(shi)劑(ji)的同時(shi)開始(shi)計(ji)時(shi)，在(zai) 340 nm 波長(chang)下(xia)記(ji)錄反應 1min 後(hou)吸(xi)光(guang)度A1 和反(fan)應 6min 後(hou)的吸(xi)光(guang)度A2，計(ji)算ΔA=A2-A1。

FBP 活性計(ji)算:

按樣(yang)本(ben)蛋(dan)白濃度(du)計(ji)算

單(dan)位的定義(yi)：每mg 組(zu)織(zhi)蛋白每分(fen)鐘生成 1 nmol 的NADPH 定義(yi)為(wei)壹個酶活(huo)力(li)單(dan)位。

FBP（nmol/min/mg prot）＝[ΔA×V 反總(zong)÷（ε×d）×109]÷(V 樣(yang)×Cpr) ÷T=321.5×ΔA÷Cpr

按樣(yang)本(ben)鮮(xian)重計(ji)算

單(dan)位的定義(yi)：每g 組(zu)織(zhi)每分(fen)鐘生成 1 nmol 的NADPH 定義(yi)為(wei)壹個酶活(huo)力(li)單(dan)位。

FBP（nmol/min/g 鮮(xian)重）＝[ΔA×V 反(fan)總(zong)÷（ε×d）×109]÷(W ×V 樣(yang)÷V 樣(yang)總(zong)) ÷T=321.5×ΔA÷W

V 反總(zong)：反應體系(xi)總(zong)體積(ji)，1×10-3 L；ε：NADPH 摩(mo)爾消光(guang)系數，6.22×103 L / mol /cm；d：比色(se)皿光(guang)徑， 1cm；V 樣(yang)：加入樣(yang)本(ben)體積(ji)，0.1 ml；V 樣(yang)總(zong)：加入(ru)提(ti)取(qu)液體積(ji)，1ml；T：反(fan)應時(shi)間，5 min；Cpr：樣(yang)本(ben)蛋(dan)白質濃度(du)，mg/ml；W：樣(yang)本(ben)質量，g。

果糖-1,6-二磷(lin)酸酶試(shi)劑(ji)盒光(guang)合系(xi)列(lie)