乙(yi)醇酸氧(yang)化酶(mei)（EC1.1.3.15）是(shi)植物光呼吸(xi)代(dai)謝中的關鍵(jian)酶(mei)，也(ye)是(shi)光下合成草酸的關鍵(jian)酶(mei)，它催(cui)化乙醇(chun)酸氧(yang)化生成乙(yi)醛(quan)酸，對研(yan)究(jiu)光呼吸(xi)代(dai)謝過(guo)程及其調控具有重(zhong)要(yao)意(yi)義(yi)。
乙(yi)醇(chun)酸氧(yang)化酶(mei)試劑盒 光合系(xi)列

乙醇(chun)酸氧(yang)化酶(mei)（glycollic oxidase, GO）試劑盒說明書

分光光度(du)法(fa) 50 管(guan) 48 樣(yang)

乙醇(chun)酸氧(yang)化酶(mei)試劑盒 光合系(xi)列

正式測(ce)定前務(wu)必取(qu) 2-3 個(ge)預(yu)期(qi)差異(yi)較(jiao)大(da)的樣(yang)本(ben)做預(yu)測(ce)定測(ce)定意(yi)義(yi)：

乙醇(chun)酸氧(yang)化酶(mei)（EC1.1.3.15）是(shi)植物光呼吸(xi)代(dai)謝中的關鍵(jian)酶(mei)，也(ye)是(shi)光下合成草酸的關鍵(jian)酶(mei)，它催(cui)化乙醇(chun)酸氧(yang)化生成乙(yi)醛(quan)酸，對研(yan)究(jiu)光呼吸(xi)代(dai)謝過(guo)程及其調控具有重(zhong)要(yao)意(yi)義(yi)。

測(ce)定原(yuan)理：

乙醇(chun)酸氧(yang)化酶(mei)催(cui)化乙醇(chun)酸氧(yang)化生成乙(yi)醛(quan)酸，乙醛(quan)酸和鹽酸苯肼(jing)反(fan)應(ying)生成乙(yi)醛(quan)酸苯腙(zong)，在(zai) 324nm 有特征吸(xi)收(shou)峰。

組成(cheng)：

試劑二(er)：粉(fen)劑×1 瓶，4℃避光保存，臨(lin)用(yong)前加(jia) 10ml 雙(shuang)蒸(zheng)水(shui)溶(rong)解；用(yong)不完(wan)的試劑分裝(zhuang)後(hou)-20℃保存，禁(jin)止(zhi)反(fan)復凍融(rong)。

自(zi)備(bei)儀器和用(yong)品(pin)：

天平(ping)、低溫(wen)離(li)心(xin)機(ji)、紫外分光光度(du)計、1ml 石英比(bi)色(se)皿(min)。

酶(mei)液(ye)提取(qu)：

按(an)照(zhao)組織質量(liang)（g）：提取(qu)液(ye)體(ti)積(ml)為 1：5~10 的比例(li)（建(jian)議稱(cheng)取(qu)約(yue) 0.1g 組(zu)織，加入 1ml 提取(qu)液(ye)），進行(xing)冰(bing)浴勻(yun)漿。12000g， 4℃離(li)心(xin) 10min，取(qu)上清，置(zhi)冰(bing)上待測(ce)。

測(ce)定步(bu)驟(zhou)：

酶(mei)活性(xing)計算公(gong)式

按(an)照(zhao)蛋白濃度(du)計算

酶(mei)活性(xing)定義：每毫克(ke)蛋(dan)白(bai)每分鐘(zhong)氧(yang)化 1 nmol 乙(yi)醇酸所需(xu)的酶(mei)量(liang)為壹(yi)個(ge)酶(mei)活力(li)單位。

GO 活性(xing)（nmol/min /mg prot）= 2．按(an)照(zhao)樣(yang)本(ben)質量(liang)計算

A

 d

×V 反(fan)總(zong)÷（V 樣(yang)×Cpr）÷T= 392×△A÷Cpr 

酶(mei)活性(xing)定義：每克(ke)組(zu)織(zhi)每分鐘(zhong)氧(yang)化 1 nmol 乙醇(chun)酸所需(xu)的酶(mei)量(liang)為壹(yi)個(ge)酶(mei)活力(li)單位。 

GO 活性(xing)（nmol/min /g 鮮(xian)重(zhong)

A

 d

×V 反(fan)總(zong)÷（V 樣(yang)×W÷V 樣(yang)總(zong)）÷T= 392×△A÷W

ε：乙醛(quan)酸苯腙(zong)毫摩(mo)爾消光系(xi)數(shu)：17L/mmol/cm；d：比色(se)皿(min)光徑，1cm；V 反(fan)總(zong)：反(fan)應(ying)總(zong)體(ti)積，1ml；V 樣(yang)：反(fan)應(ying)中樣(yang)本(ben)體(ti)積，0.05ml；V 樣(yang)總(zong)：加入提取(qu)液(ye)體(ti)積，1ml；Cpr：樣(yang)本(ben)蛋白濃度(du)，mg/ml；W，樣(yang)本(ben)質量(liang)， g；T：反(fan)應(ying)時間，3min

註意(yi)事(shi)項(xiang)：

測(ce)定之前進行(xing)預(yu)實驗(yan)，若吸(xi)光值較(jiao)高，請(qing)將樣(yang)品用(yong)提取(qu)液(ye)進行(xing)適(shi)當(dang)的稀釋再(zai)測(ce)定，並在(zai)計算公(gong)式中乘(cheng)以稀(xi)釋(shi)倍數(shu)。

色(se)素(su)含(han)量(liang)較(jiao)高的樣(yang)品，可(ke)在(zai)提取(qu)酶(mei)時加活性(xing)炭吸(xi)附。

乙醇(chun)酸氧(yang)化酶(mei)試劑盒 光合系(xi)列