丙酮(tong)酸(suan)磷酸(suan)雙激酶（pyruvate phosphate dikinase, PPDK, EC 2.7.9.1）是(shi)C4 途(tu)徑(jing)和(he)景天(tian)科(ke)酸(suan)代謝途徑(jing)的(de)限(xian)速酶，催化(hua) ATP、丙酮(tong)酸(suan)和 Pi 經(jing)三步(bu)反(fan)應生成(cheng)磷(lin)酸(suan)烯醇(chun)式(shi)丙(bing)酮(tong)酸(suan)。該(gai)酶主(zhu)要存在(zai)於(yu) C4 植(zhi)物的(de)葉綠(lv)體(ti)基(ji)質(zhi)中(zhong)，對(dui)光合(he)功(gong)能具(ju)有重要調節作用(yong)。
丙酮(tong)酸(suan)磷酸(suan)雙激酶PPDK試(shi)劑盒(he) 光合(he)系(xi)列(lie)

丙(bing)酮(tong)酸(suan)磷酸(suan)雙激酶（PPDK)試(shi)劑盒(he)說(shuo)明書(shu)

分(fen)光光度(du)法 50 管(guan)/48 樣

丙(bing)酮(tong)酸(suan)磷酸(suan)雙激酶PPDK試(shi)劑盒(he) 光合(he)系(xi)列(lie)

正(zheng)式測(ce)定(ding)前務(wu)必取 2-3 個預(yu)期差(cha)異(yi)較大的(de)樣本(ben)做(zuo)預(yu)測(ce)定(ding)測(ce)定(ding)意(yi)義(yi)：

丙(bing)酮(tong)酸(suan)磷酸(suan)雙激酶（pyruvate phosphate dikinase, PPDK, EC 2.7.9.1）是(shi)C4 途(tu)徑(jing)和(he)景天(tian)科(ke)酸(suan)代謝途徑(jing)的(de)限(xian)速酶，催化(hua) ATP、丙(bing)酮(tong)酸(suan)和 Pi 經(jing)三步(bu)反(fan)應生成(cheng)磷(lin)酸(suan)烯醇(chun)式(shi)丙(bing)酮(tong)酸(suan)。該(gai)酶主(zhu)要存在(zai)於(yu) C4 植(zhi)物的(de)葉綠(lv)體(ti)基(ji)質(zhi)中(zhong)，對(dui)光合(he)功(gong)能具(ju)有重要調節作用(yong)。

測(ce)定(ding)原理(li)：

PPDK 的(de)逆(ni)向(xiang)反應(ying)催化(hua)磷酸(suan)烯醇(chun)式(shi)丙(bing)酮(tong)酸(suan)、AMP 和(he)PPi 生(sheng)成丙酮(tong)酸(suan)、ATP 和(he)Pi，乳(ru)酸(suan)脫氫酶進(jin)壹步(bu)催化(hua)丙(bing)酮(tong)酸(suan)和NADH 生(sheng)成(cheng)乳(ru)酸(suan)和NAD⁺，在(zai) 340nm 測(ce)定(ding)NADH 減(jian)少(shao)速(su)率，計(ji)算 PPDK 活(huo)性。

組(zu)成(cheng)：

試(shi)劑三(san) ：液體(ti) 60μl×1 支(zhi)，4℃保(bao)存；體(ti)積較少(shao)，若(ruo)沾在(zai)管(guan)壁(bi)上(shang)，臨用(yong)前(qian)可低(di)速(su)離(li)心(xin)後使用(yong)。

自(zi)備(bei)儀(yi)器(qi)和用品(pin)：

紫(zi)外分(fen)光光度(du)計(ji)、臺(tai)式(shi)離(li)心(xin)機、可調(tiao)式(shi)移液器、1ml 石(shi)英比色皿、研(yan)缽、冰和蒸餾(liu)水(shui)。

樣本(ben)的(de)前(qian)處(chu)理(li)：

按(an)照組(zu)織(zhi)質(zhi)量(liang)（g）：提(ti)取液體(ti)積(ml)為(wei) 1：5~10 的(de)比例（建(jian)議稱(cheng)取約(yue) 0.1g 組(zu)織(zhi)，加入 1ml 提(ti)取液），進(jin)行(xing)冰浴勻(yun)漿。8000g 4℃離(li)心(xin) 10min，取上(shang)清(qing)，置冰上(shang)待測(ce)。

測(ce)定(ding)步(bu)驟(zhou)和加樣表(biao)：

1、分(fen)光光度(du)計(ji)預(yu)熱 30min 以(yi)上(shang)，調節波長(chang)至(zhi) 340nm，蒸餾(liu)水(shui)調(tiao)零。

2、樣本(ben)測(ce)定(ding)

工作(zuo)液的(de)配(pei)制：臨用(yong)前(qian)取試(shi)劑二(er)壹瓶(ping)加入 25ml 試(shi)劑壹和 12.5μl 試(shi)劑三(san)，充分(fen)混(hun)勻，置(zhi)於(yu) 37℃水(shui)浴 5min；用(yong)不完(wan)的(de)試(shi)劑分(fen)裝(zhuang)後-20℃保(bao)存，禁(jin)止(zhi)反(fan)復(fu)凍(dong)融。

在(zai) 1ml 石(shi)英比色皿中(zhong)加入 50μl 樣本(ben)和(he) 950μl 工作(zuo)液，混勻，立即(ji)記(ji)錄 340nm 處(chu)初(chu)始(shi)吸(xi)光值(zhi)A1 和(he)37℃反(fan)應(ying) 5min 後(hou)的(de)吸(xi)光值(zhi)A2，計(ji)算ΔA=A1-A2。

PPDK 活(huo)性計(ji)算：

按(an)樣本(ben)蛋(dan)白(bai)濃(nong)度(du)計(ji)算

單(dan)位定(ding)義(yi)：每(mei) mg 組(zu)織(zhi)蛋(dan)白(bai)每分(fen)鐘(zhong)消(xiao)耗 1nmol NADH 定(ding)義(yi)為(wei)壹個酶活(huo)力單(dan)位。

PPDK（nmol/min/mg prot）＝[ΔA×V 反(fan)總÷（ε×d）×10⁹]÷(V 樣×Cpr) ÷T=643×ΔA÷Cpr

按(an)樣本(ben)鮮(xian)重計(ji)算

單(dan)位定(ding)義(yi)：每(mei) g 組(zu)織(zhi)每分(fen)鐘(zhong)消(xiao)耗 1 nmol NADH 定(ding)義(yi)為(wei)壹個酶活(huo)力單(dan)位。

PPDK（nmol/min/g 鮮(xian)重）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×10⁹]÷(W ×V 樣÷V 樣總)÷T=643×ΔA÷W

V 反(fan)總：反應體(ti)系(xi)總體(ti)積，1×10^-3 L；ε：NADH 摩(mo)爾(er)消(xiao)光系(xi)數，6.22×10³ L / mol /cm；d：比色皿光徑(jing)，1cm； V 樣：加入樣本(ben)體(ti)積，0.05ml；V 樣總：加入提(ti)取液體(ti)積，1 ml；T：反應時間，5 min；Cpr：樣本(ben)蛋(dan)白(bai)質(zhi)濃(nong)度(du)，mg/ml；W：樣本(ben)質(zhi)量(liang)，g。

丙(bing)酮(tong)酸(suan)磷酸(suan)雙激酶PPDK試(shi)劑盒(he) 光合(he)系(xi)列(lie)