GSH 是細(xi)胞內(nei)最(zui)主要的(de)抗氧(yang)化(hua)巰基(ji)物(wu)質，在抗氧(yang)化(hua)、蛋(dan)白質巰基(ji)保護和(he)氨基(ji)酸(suan)跨(kua)膜運輸等中具有重(zhong)要(yao)作用(yong)。還原型(xing)與(yu)氧(yang)化(hua)型比值（GSH/GSSG）是細(xi)胞氧(yang)化(hua)還原狀態(tai)的(de)主要動態指(zhi)標。因此，測定細(xi)胞內(nei)GSH和GSSG 含量(liang)以及(ji)GSH/GSSG 比值，能(neng)夠(gou)很(hen)好(hao)地(di)反映細(xi)胞所處(chu)的氧(yang)化(hua)還原狀態(tai)。
還(hai)原型谷胱gan肽(tai)試劑(ji)盒(he)

還(hai)原(yuan)型(xing)谷胱gan肽(tai)（reduced glutathione, GSH）試劑(ji)盒(he)說明(ming)書

分(fen)光(guang)光(guang)度(du)法(fa) 50 管(guan)/48 樣

還(hai)原(yuan)型(xing)谷胱gan肽(tai)試劑(ji)盒(he)

正(zheng)式(shi)測定前(qian)務必取 2-3 個(ge)預期(qi)差(cha)異(yi)較大的(de)樣本(ben)做(zuo)預測定測定意(yi)義(yi)：

GSH 是細(xi)胞內(nei)最(zui)主要的(de)抗氧(yang)化(hua)巰基(ji)物(wu)質，在抗氧(yang)化(hua)、蛋(dan)白質巰基(ji)保護和(he)氨基(ji)酸(suan)跨(kua)膜運輸等中具有重(zhong)要(yao)作用(yong)。還原型(xing)與(yu)氧(yang)化(hua)型比值（GSH/GSSG）是細(xi)胞氧(yang)化(hua)還原狀態(tai)的(de)主要動態指(zhi)標。因此，測定細(xi)胞內(nei)GSH和(he)GSSG 含量(liang)以及(ji)GSH/GSSG 比值，能(neng)夠(gou)很(hen)好(hao)地(di)反映細(xi)胞所處(chu)的氧(yang)化(hua)還原狀態(tai)。

測定原(yuan)理(li)：

DTNB 與(yu)GSH 反(fan)應生(sheng)成復合物(wu)，在 412nm 處(chu)有(you)特(te)征吸收峰；其吸光度(du)與(yu)GSH 含量(liang)成正(zheng)比。

組成：

自(zi)備(bei)儀(yi)器(qi)和用(yong)品(pin)：

可見(jian)分(fen)光(guang)光(guang)度(du)計(ji)、低(di)溫離心(xin)機(ji)、水浴(yu)鍋(guo)、可調(tiao)節(jie)移(yi)液(ye)器(qi)、1ml 玻璃比色皿(min)和蒸(zheng)餾(liu)水。

粗酶液(ye)提取：

組織：按(an)照組織質(zhi)量（g）：試劑(ji)壹體(ti)積(ml)為(wei) 1：5~10 的(de)比例（建議稱取約(yue) 0.1g 組織，加(jia)入(ru) 1ml 試劑(ji)壹）進(jin)行(xing)冰浴勻(yun)漿(jiang)。8000g，4℃離心(xin) 10min，取上(shang)清(qing)置(zhi)冰上待(dai)測。

細(xi)菌、真(zhen)菌：按照(zhao)細(xi)胞數(shu)量(liang)（104 個(ge)）：試劑(ji)壹體(ti)積（ml）為(wei) 500~1000：1 的(de)比例（建議 500 萬(wan)細(xi)胞加(jia)入(ru) 1ml 試劑(ji)壹），冰浴超聲波破碎(sui)細(xi)胞（功率 300w，超(chao)聲 3 秒，間隔 7 秒(miao)，總(zong)時間(jian) 3min）；然(ran)後(hou) 8000g， 4℃，離心(xin) 10min，取上(shang)清(qing)置(zhi)於(yu)冰上待(dai)測。

血(xue)清(qing)等液(ye)體：直(zhi)接測定。

GSH 測定操(cao)作：

分(fen)光(guang)光(guang)度(du)計(ji)預熱 30min，調(tiao)節(jie)波長(chang)到 412 nm，蒸餾(liu)水調(tiao)零(ling)。

試劑(ji)二置(zhi)於(yu) 25℃（壹般(ban)物(wu)種）或(huo)者 37℃（哺乳動物(wu)）水浴(yu)中保溫 30min。

空(kong)白管：取 1ml 玻璃比色皿(min)，依次加入(ru) 100μl 蒸餾(liu)水，700μl 試劑(ji)二，200μl 試劑(ji)三(san)，混(hun)勻(yun)靜置(zhi) 2min 後(hou)測定 412 nm 吸光度(du)A1。

測定管(guan)：取 1ml 玻璃比色皿(min)，依次加入(ru) 100μl 上清(qing)液(ye)，700μl 試劑(ji)二，200μl 試劑(ji)三(san)，混(hun)勻(yun)靜置(zhi) 2min 後(hou)測定 412 nm 吸光度(du)A2。

註(zhu)意(yi)：空(kong)白管只(zhi)需(xu)要(yao)測定壹(yi)次。

GSH 含量(liang)計(ji)算公(gong)式：

GSH 標(biao)準(zhun)曲(qu)線公(gong)式：y=1.5 x（x 為(wei)GSH 濃(nong)度(du)，μ mol /ml；y 為(wei)吸光值）

GSH 計(ji)算(suan)：

按(an)蛋(dan)白濃度(du)計(ji)算(suan)

GSH（μ mol/ mg prot）=(A2－A1) ÷1.5×V 樣÷（V 樣×Cpr ）=0.667×(A2－A1) ÷Cpr

按(an)樣本(ben)鮮(xian)重(zhong)計(ji)算

GSH（μ mol/g 鮮(xian)重(zhong)）=(A2－A1) ÷1.5×V 樣÷(V 樣÷V 樣總(zong)×W)=0.667×(A2－A1) ÷W

按(an)細(xi)胞數(shu)量(liang)計(ji)算(suan)

GSH（μ mol /104 cell）=(A2－A1) ÷1.5×V 樣÷(V 樣÷V 樣總(zong)×細(xi)胞數(shu)量(liang))=0.667×(A2－A1) ÷細(xi)胞數(shu)量(liang)

按(an)液(ye)體體積計算(suan)

GSH（μ mol/ ml）=(A2－A1) ÷1.5×V 樣÷V 樣 =0.667×(A2－A1)

V 樣總(zong)：上(shang)清(qing)液(ye)總體積，1 ml；V 樣：加(jia)入(ru)反應體(ti)系(xi)中上清液(ye)體積，100μl=0.1 ml；W：樣品(pin)質量，g ；Cpr：上清液(ye)蛋(dan)白質濃(nong)度(du)，mg/ml；

註(zhu)意(yi)事(shi)項：

試劑(ji)壹中含有(you)蛋(dan)白質沈澱劑(ji)，因此上清(qing)液(ye)不能(neng)用(yong)於(yu)蛋(dan)白濃度(du)測定。

最(zui)di檢(jian)出限(xian)為(wei) 0.01mmol/L。

還(hai)原(yuan)型(xing)谷胱gan肽(tai)試劑(ji)盒(he)