GSH/GSSG 是細胞內最(zui)重要的氧(yang)化還(hai)原對(dui)之(zhi)壹(yi)。因此(ci)，測定(ding)細(xi)胞內 GSH 和(he)GSSG 含量(liang)以及GSH/GSSG比(bi)值(zhi)，能(neng)夠很(hen)好地反(fan)映細(xi)胞(bao)所處的氧化還(hai)原狀(zhuang)態(tai)，也是(shi)谷(gu)胱(guang)gan肽(tai)氧化還(hai)原循(xun)環的(de)主(zhu)要指(zhi)標(biao)之(zhi)壹(yi)。
氧化型(xing)谷(gu)胱(guang)gan肽(tai)含量(liang)測定(ding)試劑盒(he)

氧(yang)化型(xing)谷(gu)胱(guang)gan肽(tai)含量(liang)測定(ding)試劑盒(he)說明書(shu)

分(fen)光光度(du)法 50 管/48 樣(yang)

氧(yang)化型(xing)谷(gu)胱(guang)gan肽(tai)含量(liang)測定(ding)試劑盒(he)

正(zheng)式測定(ding)前(qian)務(wu)必取 2-3 個(ge)預期差(cha)異較(jiao)大(da)的樣(yang)本(ben)做(zuo)預測定(ding)測定(ding)意(yi)義(yi)：

GSH/GSSG 是(shi)細胞(bao)內最(zui)重要的氧(yang)化還(hai)原對(dui)之(zhi)壹(yi)。因此(ci)，測定(ding)細(xi)胞內 GSH 和(he)GSSG 含量(liang)以及GSH/GSSG比(bi)值(zhi)，能(neng)夠很(hen)好地反(fan)映細(xi)胞(bao)所處的氧化還(hai)原狀(zhuang)態(tai)，也是(shi)谷(gu)胱(guang)gan肽(tai)氧化還(hai)原循(xun)環的(de)主(zhu)要指(zhi)標(biao)之(zhi)壹(yi)。

測定(ding)原理：

利用 2-VP 法測GSSG 含量(liang)。

組(zu)成(cheng)：

試劑五(wu)： 液體 30μl×1 瓶(ping)，-20℃保(bao)存。臨用前(qian)加(jia)入 0.6 ml 試劑三稀釋(shi)，4℃保(bao)存。試劑六(liu)：粉(fen)劑×1 瓶(ping)，4℃保(bao)存。臨用前(qian)加(jia)入 40 ml 試劑三溶解(jie)，現配(pei)現(xian)用。

自(zi)備(bei)儀(yi)器(qi)和用品(pin)：

可(ke)見分光光度(du)計(ji)、低(di)溫離(li)心機(ji)、水浴鍋(guo)、可(ke)調(tiao)節(jie)移(yi)液(ye)器(qi)、1ml 玻璃(li)比(bi)色皿和蒸餾(liu)水。

粗(cu)酶液(ye)提(ti)取：

組(zu)織(zhi)：按照組(zu)織(zhi)質(zhi)量(liang)（g）：試劑壹(yi)體積(ml)為(wei) 1：5~10 的(de)比(bi)例（建(jian)議稱(cheng)取約 0.1g 組(zu)織(zhi)，加(jia)入 1ml 試劑壹(yi)）進行(xing)冰(bing)浴勻漿。8000g 4℃離心(xin) 10min，取上(shang)清(qing)液(ye)（如上(shang)清(qing)不清(qing)澈(che)，再離心(xin) 3min）待(dai)測。

細(xi)菌、真菌：按(an)照細(xi)胞(bao)數(shu)量(liang)（104 個(ge)）：試劑壹(yi)體積（ml）為(wei) 500~1000：1 的(de)比(bi)例（建(jian)議 500 萬細(xi)胞(bao)加(jia)入 1ml 試劑壹(yi)），冰浴超(chao)聲(sheng)波破(po)碎細胞(bao)（功(gong)率(lv) 300w，超聲(sheng) 3 秒，間隔 7 秒(miao)，總時間 3min）；8000g 4℃離心(xin) 10min，取上(shang)清(qing)液(ye)（如上(shang)清(qing)不清(qing)澈(che)，再離心(xin) 3min）的蒸餾(liu)水混勻(yun)待(dai)測。

血清(qing)等(deng)液體：直(zhi)接測定(ding)。

測定(ding)操(cao)作(zuo):

分(fen)光光度(du)計(ji)預熱 30 min，調(tiao)節(jie)波長(chang)到 412 nm，蒸餾(liu)水調(tiao)零。

試劑三置於 25℃（壹(yi)般(ban)物(wu)種）或者(zhe) 37℃（哺(bu)乳(ru)動物(wu)）水(shui)浴中(zhong)保(bao)溫 30min。

測定(ding)管：取 1 ml EP 管，加(jia)入 100 μ L 上(shang)清(qing)液(ye)，5μ L 試劑二，蓋緊後(hou)混(hun)勻，置(zhi)於 37℃水浴 30min；依次加(jia)入 100 μ L 試劑四(si)，10 μ L 試劑五(wu)，700 μ L 試劑六(liu)，迅速(su)混勻(yun)後(hou)，立(li)即測定(ding) 30 s 和(he) 150 s 光吸收A1 和A2，計(ji)算ΔA=A2-A1。

GSSG 含量(liang)計(ji)算公式:

1、標(biao)準(zhun)條(tiao)件下測定(ding)的(de)回歸方(fang)程為(wei) y=0.0276x-0.0011；x 為(wei)標(biao)準(zhun)品濃度(du)（nmol/ml），y 為吸光值(zhi)(ΔA)。

2、 按(an)蛋白濃度(du)計(ji)算

GSSG（nmol/mg prot）=(ΔA+0.0011)÷0.0276×V 樣(yang)÷(V 樣(yang)×Cpr)

=36.23×(ΔA+0.0011)÷Cpr

3、按(an)樣(yang)本(ben)鮮重計(ji)算

GSSG（nmol /g 鮮重）=(ΔA+0.0011)÷0.0276×V 樣(yang)÷(V 樣(yang)÷V 樣(yang)總×W)

=36.23×(ΔA+0.0011)÷W

4、按(an)細胞(bao)數(shu)量(liang)計(ji)算

GSSG（nmol/104 cell）=(ΔA+0.0011)÷0.0276×V 樣(yang)÷(V 樣(yang)÷V 樣(yang)總×細胞(bao)數(shu)量(liang))

=36.23×(ΔA+0.0011)÷細(xi)胞數(shu)量(liang)

5、按(an)照液(ye)體(ti)體積計(ji)算 GSSG（nmol/ml）=(ΔA+0.0011)÷0.0276×V 樣(yang)÷V 樣(yang)

=36.23×(ΔA+0.0011)

V 樣(yang)：反(fan)應中(zhong)加(jia)入樣(yang)本(ben)體(ti)積，0.1ml；V 樣(yang)總：加(jia)入提(ti)取液體積， 1ml；W：樣(yang)品質(zhi)量(liang)，g，Cpr：樣(yang)本(ben)蛋白濃度(du)（mg/ml）

註(zhu)意事項(xiang)：

提(ti)取過程中(zhong)去掉蛋白質(zhi)，所以提(ti)取液不能(neng)用於(yu)測定(ding)蛋白含量(liang)。

臨(lin)用前(qian)配(pei)制的(de)試劑配(pei)好(hao)後 4℃保(bao)存，2 天(tian)內使(shi)用完畢。

最(zui)di檢出(chu)限為(wei) 0.1μmol/L。

反(fan)應溫(wen)度(du).嚴格(ge)來說(shuo)，為保(bao)證(zheng)重復(fu)性，應(ying)在 25℃下進行(xing)反(fan)應。

反(fan)應時(shi)間需精(jing)確(que)控制，否(fou)則(ze)會影(ying)響反(fan)應速(su)率(lv)計(ji)算，產生較(jiao)大(da)誤(wu)差(cha)。

樣(yang)品中(zhong)的GSSG 濃度(du)盡(jin)可能(neng)低(di)壹些，否(fou)則(ze)反(fan)應速(su)率(lv)太大，沒(mei)法控制，所以稀釋(shi)倍數(shu)要盡(jin)量(liang)大些。