GST 催(cui)化(hua)GSH 與CDNB 結(jie)合(he)，其(qi)結(jie)合(he)產物(wu)的光(guang)吸收峰(feng)波長(chang)為(wei) 340nm；通(tong)過(guo)測(ce)定 340nm 波長(chang)處吸(xi)光(guang)度上(shang)升(sheng)速率(lv)，即(ji)可計(ji)算(suan)出 GST 活(huo)性(xing)。
谷胱(guang)gan肽(tai)S-轉(zhuan)移酶(mei)試劑(ji)盒

谷(gu)胱gan肽(tai)S-轉(zhuan)移酶(mei)（glutathione S-transferase，GST）試劑(ji)盒說(shuo)明(ming)書(shu)

分(fen)光(guang)光(guang)度法(fa) 50 管(guan)/48 樣(yang)

谷(gu)胱gan肽(tai)S-轉(zhuan)移酶(mei)試劑(ji)盒

正式(shi)測(ce)定前務必(bi)取(qu) 2-3 個(ge)預期差(cha)異較(jiao)大(da)的樣(yang)本(ben)做預測定測定意義：

GST 是(shi)壹種(zhong)具(ju)有(you)多種生理功(gong)能的蛋白質(zhi)家族(zu)，主(zhu)要存在於(yu)細(xi)胞(bao)質(zhi)內。GST 是(shi)體內(nei)解(jie)毒(du)酶(mei)系統的(de)重要組成部分，主(zhu)要催(cui)化(hua)各種(zhong)化(hua)學物(wu)質及(ji)其(qi)代(dai)謝產物(wu)與 GSH 的(de)巰基(ji)共價(jia)結(jie)合(he)，使親(qin)電化(hua)合物(wu)變為(wei)親水物(wu)質(zhi)，易(yi)於(yu)從(cong)膽(dan)汁或尿液中排(pai)泄，達到將(jiang)體內(nei)各種(zhong)潛(qian)在或具(ju)備毒(du)性(xing)的物(wu)質(zhi)降(jiang)解(jie)並排(pai)出體(ti)外(wai)的(de)目的。因此(ci)，GST 在保(bao)護(hu)細(xi)胞免受親(qin)電(dian)子(zi)化(hua)合物(wu)的損(sun)傷中發揮(hui)著重(zhong)要的生物(wu)學功(gong)能。此(ci)外(wai)，因為(wei) GST 具(ju)有(you)GSH-Px 活(huo)性(xing)，亦(yi)稱(cheng)為(wei)non-Se GSH-Px，具(ju)有(you)修(xiu)復(fu)氧化(hua)破壞(huai)的大(da)分子(zi)如 DNA、蛋白質(zhi)等(deng)的(de)功(gong)能。註(zhu)意，GST 催(cui)化(hua)的反(fan)應(ying)減少GSH含(han)量，但(dan)是不(bu)增加(jia)GSSG 含量。

測(ce)定原理：

GST 催(cui)化(hua)GSH 與CDNB 結(jie)合(he)，其(qi)結(jie)合(he)產物(wu)的光(guang)吸收峰(feng)波長(chang)為(wei) 340nm；通(tong)過(guo)測(ce)定 340nm 波長(chang)處吸(xi)光(guang)度上(shang)升(sheng)速率(lv)，即(ji)可計(ji)算(suan)出 GST 活(huo)性(xing)。

組(zu)成：

試劑(ji)三：粉劑×1 瓶(ping)，4℃保(bao)存。臨(lin)用(yong)前加(jia) 5 ml 蒸(zheng)餾(liu)水(shui)溶解(jie)。

自(zi)備儀(yi)器和(he)用(yong)品：

紫(zi)外(wai)分(fen)光(guang)光(guang)度計(ji)、低溫離心(xin)機、水浴(yu)鍋(guo)、可調(tiao)節移液器、1ml 石英比色皿(min)和(he)蒸(zheng)餾(liu)水(shui)。

粗酶(mei)液提取：

組(zu)織(zhi)：按照組(zu)織(zhi)質(zhi)量(liang)（g）：試劑(ji)壹體積(ji)(ml)為(wei) 1：5~10 的(de)比例（建議(yi)稱(cheng)取(qu)約 0.1g 組(zu)織(zhi)，加(jia)入(ru) 1ml 試劑(ji)壹(yi)）進(jin)行(xing)冰(bing)浴(yu)勻漿。8000g，4℃離心(xin) 10min，取上(shang)清(qing)置冰(bing)上(shang)待測。

細(xi)菌、真(zhen)菌(jun)：按照細(xi)胞數量(liang)（10⁴ 個）：試劑(ji)壹體積(ji)（ml）為(wei) 500~1000：1 的比(bi)例（建議(yi) 500 萬細(xi)胞加入(ru) 1ml 試劑(ji)壹），冰(bing)浴超(chao)聲波破(po)碎細胞(bao)（功(gong)率(lv) 300w，超(chao)聲 3 秒(miao)，間(jian)隔 7 秒(miao)，總時(shi)間(jian) 3min）；然(ran)後 8000g， 4℃，離心(xin) 10min，取上(shang)清(qing)置於(yu)冰上(shang)待測。

血(xue)清等(deng)液體：直(zhi)接(jie)測定。

測(ce)定操作：

分(fen)光(guang)光(guang)度計(ji)預熱 30 min，調(tiao)節波長(chang)到 340 nm，用(yong)蒸(zheng)餾(liu)水(shui)調(tiao)零。

試劑(ji)三放在 25℃（壹(yi)般物(wu)種(zhong)）或者(zhe) 37℃（哺(bu)乳動(dong)物(wu)）保(bao)溫。

測(ce)定管：取 1ml 石英比色皿(min)，加入 100μl 上(shang)清(qing)液，900μl 試劑(ji)二和(he) 100μl 試劑(ji)三，迅速混(hun)勻後於(yu) 340nm測(ce)定吸光(guang)度變化(hua)，記(ji)錄(lu) 10 s 和(he) 310 s 吸(xi)光(guang)度為(wei)A1 和(he)A2。

GST 活(huo)性(xing)計(ji)算(suan)公式(shi)：

按蛋白濃(nong)度計(ji)算(suan)

活(huo)性(xing)單位(wei)定義：在 25℃或者(zhe) 37℃中(zhong)，每毫(hao)克(ke)蛋白每(mei)分(fen)鐘催(cui)化(hua) 1nmol/L CDNB 與GSH 結(jie)合(he)為(wei) 1 個(ge)酶(mei)活(huo)單(dan)位(wei)。

GST（nmol/min/mg prot）=(A2－A1))÷ε÷d×10⁹×V 反(fan)總÷(Cpr×V 樣(yang))÷T

=230×((A2-A1) ÷Cpr

按樣(yang)本(ben)質(zhi)量(liang)計(ji)算(suan)

活(huo)性(xing)單位(wei)定義：在 25℃或者(zhe) 37℃中(zhong)，每克(ke)樣(yang)品每分(fen)鐘催(cui)化(hua) 1nmol/L CDNB 與GSH 結(jie)合(he)為(wei) 1 個(ge)酶(mei)活(huo)單(dan)位(wei)。

GST（nmol/min/g 鮮重）=(A2-A1)÷ε÷d×10⁹×V 反(fan)總÷(W×V 樣(yang)÷V 樣(yang)總)÷T

=230×(A2-A1) ÷W

按細胞(bao)數量(liang)計(ji)算(suan)

活(huo)性(xing)單位(wei)定義：在 25℃或者(zhe) 37℃中(zhong)，每 10⁴ 個(ge)細胞(bao)每(mei)分鐘催(cui)化(hua) 1nmol/L CDNB 與GSH 結(jie)合(he)為(wei) 1 個(ge)酶(mei)活(huo)單(dan)位(wei)。

GST（nmol/min/10⁴ cell）=(A2-A1)÷ε÷d×10⁹×V 反(fan)總÷(細(xi)胞(bao)數量(liang)×V 樣(yang)÷V 樣(yang)總)÷T

=230×(A2-A1) ÷細(xi)胞數量(liang)

按液體體(ti)積(ji)計(ji)算(suan)

活(huo)性(xing)單位(wei)定義：在 25℃或者(zhe) 37℃中(zhong)，每毫(hao)升(sheng)液體每(mei)分(fen)鐘催(cui)化(hua) 1nmol/L CDNB 與GSH 結(jie)合(he)為(wei) 1 個(ge)酶(mei)活(huo)單(dan)位(wei)。

GST（nmol/min/ml）=(A2-A1)÷ε÷d×10⁹×V 反(fan)總÷V 樣(yang)÷T

= 230×(A2-A1)

ε：產物(wu)摩爾(er)消光(guang)系數，9.6×10³ L/mol /cm；d：比(bi)色皿(min)光(guang)徑，1cm；10⁶：1mol=1×10⁶μmol；V 反(fan)總：反(fan)應(ying)體(ti)系總體(ti)積(ji)，1100μl=0.0011 L；Cpr：上(shang)清(qing)液蛋白質(zhi)濃(nong)度（mg/ml），需(xu)要另外(wai)測(ce)定，建議(yi)選用(yong)本(ben)公司生產的(de)BCA 蛋白質(zhi)濃(nong)度測(ce)定試劑(ji)盒；V 樣(yang)：加(jia)入反(fan)應(ying)體系中(zhong)上(shang)清(qing)液體積(ji)，100μl=0.1 ml；V 樣(yang)總：加(jia)入(ru)提取液體(ti)積(ji)，1ml；W，樣(yang)本(ben)質(zhi)量(liang)，g；T：反(fan)應(ying)時(shi)間(jian)（min），5min。

註(zhu)意事(shi)項：

樣(yang)品處理等(deng)過(guo)程(cheng)均需(xu)要在冰(bing)上(shang)進(jin)行(xing)，且(qie)須(xu)在當(dang)日(ri)測(ce)定酶(mei)活(huo)力(li)；

細(xi)胞中(zhong)GST 活(huo)性(xing)測定時(shi)，細胞(bao)數目須在 300 萬-500 萬之(zhi)間(jian)，細(xi)胞中 GST 的(de)提取時(shi)可加(jia)試劑(ji)壹後研磨或超(chao)聲波處理，不(bu)能用(yong)細胞(bao)裂(lie)解(jie)液處理細(xi)胞；

本(ben)法(fa)測(ce)定GST 活(huo)性(xing)的線(xian)性(xing)範圍可達(da) 76 μmol/min /L，測(ce)定前先用(yong) 1～2 個(ge)樣(yang)做預實驗，如 5min 內反(fan)應(ying)不(bu)成線性(xing)，須對(dui)樣(yang)品用(yong)蒸(zheng)餾(liu)水(shui)稀釋，計(ji)算(suan)結(jie)果(guo)乘(cheng)以稀釋倍(bei)數；

測(ce)定反(fan)映(ying)的溫度對(dui)測(ce)定結(jie)果(guo)有(you)影(ying)響(xiang)，請控(kong)制(zhi)在 25℃或者(zhe) 37℃（哺(bu)乳動(dong)物(wu)）。

谷(gu)胱gan肽(tai)S-轉(zhuan)移酶(mei)試劑(ji)盒