γ-GT 是γ-谷氨(an)酰循(xun)環中的(de)關鍵酶(mei)，催化GSH 降(jiang)解。γ-GT 催(cui)化GSH 或(huo)者(zhe)其(qi)他(ta)γ-谷氨(an)酰基(ji)化合物(wu)上的(de)γ-谷氨(an)酰基(ji)轉(zhuan)移到(dao)受(shou)體(ti)。也可(ke)以(yi)催化 GSH 和其(qi)他(ta)γ-谷氨(an)酰基(ji)化合物(wu)的(de)水(shui)解，產生谷an酸(suan)鹽，在(zai)細胞(bao)外谷胱(guang)gan肽(tai)新陳代(dai)謝(xie)中起了(le)重(zhong)要的(de)作(zuo)用。
γ-谷氨(an)酰轉(zhuan)肽(tai)酶(mei)試(shi)劑盒(he) 谷胱(guang)gan肽(tai)系(xi)列(lie)

γ-谷氨(an)酰轉(zhuan)肽(tai)酶(mei)（γ-glutamyltranspeptidase, γ-GT）試(shi)劑盒(he)說明(ming)書(shu)

分(fen)光(guang)光(guang)度法(fa) 50 管(guan)/48 樣(yang)

γ-谷氨(an)酰轉(zhuan)肽(tai)酶(mei)試(shi)劑盒(he) 谷胱(guang)gan肽(tai)系(xi)列(lie)

正(zheng)式測定(ding)前(qian)務必取(qu) 2-3 個(ge)預(yu)期差異較(jiao)大(da)的(de)樣(yang)本做(zuo)預(yu)測(ce)定(ding)測(ce)定(ding)意(yi)義(yi)：

γ-GT 是γ-谷氨(an)酰循(xun)環中的(de)關鍵酶(mei)，催化GSH 降(jiang)解。γ-GT 催化GSH 或(huo)者(zhe)其(qi)他(ta)γ-谷氨(an)酰基(ji)化合物(wu)上的(de)γ-谷氨(an)酰基(ji)轉(zhuan)移到(dao)受(shou)體(ti)。也可(ke)以(yi)催化 GSH 和其(qi)他(ta)γ-谷氨(an)酰基(ji)化合物(wu)的(de)水(shui)解，產生谷an酸(suan)鹽，在(zai)細胞(bao)外谷胱(guang)gan肽(tai)新陳代(dai)謝(xie)中起了(le)重(zhong)要的(de)作(zuo)用。

測定(ding)原理：

γ-GT 催化谷氨(an)酰對硝(xiao)基(ji)苯胺中γ-谷氨(an)酰基(ji)轉(zhuan)移給(gei) N-甘an酰甘an酸(suan)，生成對硝(xiao)基(ji)苯胺，在(zai) 405nm 有(you)特征光(guang)吸(xi)收(shou)；通(tong)過(guo)測(ce)定(ding) 405nm 光(guang)吸(xi)收(shou)增(zeng)加速率，來(lai)計算(suan)γ-GT 酶(mei)活性。

組(zu)成：

工作(zuo)液(ye)（在(zai)試(shi)劑二(er)瓶(ping)中(zhong)配制）：臨(lin)用(yong)前(qian)配制，把(ba)試(shi)劑三倒入試(shi)劑二(er)瓶(ping)中(zhong)，充(chong)分(fen)溶解（室(shi)溫(wen)過(guo)低時(shi)可(ke)以(yi)

40℃水(shui)浴(yu)促(cu)進(jin)溶解）；然(ran)後把(ba)試(shi)劑四(si)倒(dao)入試(shi)劑二(er)瓶(ping)中(zhong)，混勻後室(shi)溫(wen)保(bao)存(cun)。

自備儀(yi)器和用品：

可(ke)見分(fen)光(guang)光(guang)度計(ji)、低溫(wen)離心機(ji)、水(shui)浴(yu)鍋、可(ke)調(tiao)節移(yi)液(ye)器(qi)、1ml 玻璃(li)比色皿(min)和蒸(zheng)餾(liu)水(shui)

粗酶(mei)液(ye)提取(qu)：

組(zu)織：按(an)照(zhao)組(zu)織質(zhi)量（g）：試(shi)劑壹(yi)體(ti)積(ml)為 1：5~10 的(de)比例(li)（建議稱(cheng)取(qu)約 0.1g 組(zu)織，加入 1ml 試(shi)劑壹(yi)）進(jin)行(xing)冰浴(yu)勻(yun)漿(jiang)。8000g，4℃離心(xin) 15min，取(qu)上清(qing)，置(zhi)冰(bing)上待測。

細菌(jun)、真(zhen)菌：按(an)照(zhao)細胞(bao)數量（104 個(ge)）：試(shi)劑壹(yi)體(ti)積（ml）為 500~1000：1 的(de)比例(li)（建議 500 萬(wan)細胞(bao)加入 1ml 試(shi)劑壹(yi)），冰(bing)浴超聲波(bo)破(po)碎(sui)細胞(bao)（功率(lv) 300w，超(chao)聲 3 秒，間隔 7 秒，總時(shi)間 3min）；然(ran)後 8000g， 4℃，離(li)心(xin) 15min，取(qu)上清(qing)置(zhi)於冰(bing)上待測。

血清(qing)等(deng)液(ye)體(ti)：直接(jie)測(ce)定(ding)。

γ-GT 測定(ding)操(cao)作(zuo)：

分(fen)光(guang)光(guang)度計(ji)預熱(re) 30min，調(tiao)節波(bo)長(chang)到 405 nm，蒸(zheng)餾(liu)水(shui)調(tiao)零(ling)。

試(shi)劑二(er)置(zhi)於 25℃（壹(yi)般(ban)物(wu)種）或者(zhe) 37℃（哺(bu)乳(ru)動(dong)物(wu)）水(shui)浴(yu)中預熱(re) 30min（保證無(wu)沈澱(dian)）。

測定(ding)管(guan)：取(qu) 1ml 玻璃(li)比色皿(min)，依次加入 100μl 上清(qing)液(ye)，900μl 工(gong)作(zuo)液(ye)，混勻後於 405nm 測(ce)定(ding) 10 s 和 70 s時(shi)吸(xi)光度，記為A1 和A2。

γ-GT 活性計算公(gong)式：

標準(zhun)曲(qu)線(xian)：y=0.006x+0.0016，x 為對硝(xiao)基(ji)苯胺濃(nong)度，y 為吸(xi)光值(zhi)，R2=0.999。

按(an)蛋白(bai)濃(nong)度計(ji)算

活性單(dan)位定(ding)義(yi)：25℃或(huo)者(zhe) 37℃中(zhong)，每(mei)毫克(ke)蛋白(bai)每(mei)分(fen)鐘催化產生 1μmol 對硝(xiao)基(ji)苯胺為 1 個(ge)酶(mei)活單(dan)位。

γ-GT（μmol/min/mg prot）=[ (A2－A1)－0.0016]÷0.006×V 反(fan)總÷（Cpr×V 樣(yang)）÷T

=1.67 × [ (A2－A1)－0.0016] ÷ Cpr

按(an)樣(yang)本質(zhi)量計(ji)算

活性單(dan)位定(ding)義(yi)：25℃或(huo)者(zhe) 37℃中(zhong)，每(mei)克(ke)樣(yang)本每(mei)分(fen)鐘催化產生 1μmol 對硝(xiao)基(ji)苯胺為 1 個(ge)酶(mei)活單(dan)位。

γ-GT（μmol/min/g 鮮重(zhong)）=[ (A2－A1)－0.0016]÷0.006×V 反(fan)總÷(W×V 樣(yang)÷V 樣(yang)總(zong))÷T

=1.67 × [ (A2－A1)－0.0016] ÷W

按(an)細胞(bao)數量計(ji)算(suan)

活性單(dan)位定(ding)義(yi)：25℃或(huo)者(zhe) 37℃中(zhong)，每(mei) 104 個(ge)細胞(bao)每(mei)分(fen)鐘催化產生 1μmol 對硝(xiao)基(ji)苯胺為 1 個(ge)酶(mei)活單(dan)位。

γ-GT（μmol/min/104 cell）=[ (A2－A1)－0.0016]÷0.006×V 反(fan)總÷(細胞(bao)數量×V 樣(yang)÷V 樣(yang)總(zong))÷T

=1.67 × [ (A2－A1)－0.0016] ÷細胞(bao)數量

按(an)液(ye)體(ti)體(ti)積計(ji)算(suan)

活性單(dan)位定(ding)義(yi)：25℃或(huo)者(zhe) 37℃中(zhong)，每(mei)毫升液(ye)體(ti)每(mei)分(fen)鐘催化產生 1μmol 對硝(xiao)基(ji)苯胺為 1 個(ge)酶(mei)活單(dan)位。

γ-GT（μmol/min/ml）= [ (A2－A1)－0.0016]÷0.006×V 反(fan)總÷V 樣(yang)÷T

= 1.67 × [ (A2－A1)－0.0016]

V 反(fan)總：反(fan)應(ying)體(ti)系(xi)總體(ti)積（L），1000μl=0.001 L；Cpr：蛋白(bai)濃(nong)度（mg/ml）；V 樣(yang)：反(fan)應(ying)體(ti)系(xi)中加入上清(qing)液(ye)體(ti)積（ml），100μl=0.1 ml；V 樣(yang)總(zong)：加入提取(qu)液(ye)體(ti)積，1ml；W，樣(yang)本質(zhi)量，g；T：反(fan)應(ying)時(shi)間（min）， 1min。

註(zhu)意(yi)事項：

培養細胞(bao)中γ-GT 活(huo)性測定(ding)時(shi)，細胞(bao)數目須(xu)在(zai) 300 萬-500 萬(wan)之(zhi)間，細胞(bao)中γ-GT 的(de)提取(qu)時(shi)可(ke)加試(shi)劑壹(yi)後研(yan)磨(mo)或超(chao)聲(sheng)波(bo)處(chu)理，不能用(yong)細胞(bao)裂(lie)解液(ye)處(chu)理細胞(bao)（防止因(yin)為蛋白(bai)質(zhi)變性導(dao)致酶(mei)失(shi)活）。

配置(zhi)好(hao)的(de)工作(zuo)液(ye) 2 周(zhou)內使(shi)用(yong)完(wan)畢(bi)。

γ-谷氨(an)酰轉(zhuan)肽(tai)酶(mei)試(shi)劑盒(he) 谷胱(guang)gan肽(tai)系(xi)列(lie)