AchE 屬(shu)於絲an酸(suan)水(shui)解酶，廣泛存在於各種動(dong)物(wu)組(zu)織(zhi)和(he)血清中。AchE 催化(hua)乙酰(xian)dan堿（Ach）水(shui)解，在神經傳(chuan)導(dao)調節中起重(zhong)要(yao)作用(yong)。
乙酰(xian)dan堿酯酶(mei)活(huo)性(xing)測(ce)定(ding)試劑盒(he)

乙酰(xian)dan堿酯酶(mei)（acetylcholinesterase，AchE）活(huo)性(xing)測(ce)定(ding)試劑盒(he)說(shuo)明(ming)書

分光(guang)光(guang)度(du)法 50 管/48 樣

乙酰(xian)dan堿酯酶(mei)活(huo)性(xing)測(ce)定(ding)試劑盒(he)

正(zheng)式測(ce)定(ding)前(qian)務(wu)必取(qu) 2-3 個(ge)預期(qi)差異較大的樣本做預測(ce)定(ding)測(ce)定(ding)意(yi)義：

AchE 屬(shu)於絲an酸(suan)水(shui)解酶，廣泛存在於各種動(dong)物(wu)組(zu)織(zhi)和(he)血清中。AchE 催化(hua)乙酰(xian)dan堿（Ach）水解(jie)，在神經傳(chuan)導(dao)調節中起重(zhong)要(yao)作用(yong)。

測(ce)定(ding)原理：

AchE 催化(hua)Ach 水解(jie)生(sheng)成(cheng)dan堿，dan堿與(yu)二(er)硫(liu)對硝基苯甲(jia)酸（DTNB）作用(yong)生(sheng)成(cheng) 5-巰基(ji)-硝基(ji)苯甲(jia)酸（TNB）； TNB 在 412nm 處有吸收峰(feng)，通過測(ce)定(ding) 412 nm 吸光(guang)度(du)增加速(su)率，計(ji)算 AchE 活(huo)性(xing)。

組成(cheng)：

試劑二(er)：粉(fen)劑×1 瓶，4℃保存。臨用(yong)前(qian)加入(ru) 2.6ml 試劑壹，充(chong)分震(zhen)蕩溶解。試劑三：粉(fen)劑×1 瓶，4℃保存。臨用(yong)前(qian)加入(ru) 2.6ml 試劑壹，充(chong)分震(zhen)蕩溶解。

自備儀器和(he)用(yong)品(pin)：

可(ke)見(jian)分(fen)光(guang)光(guang)度(du)計(ji)、臺(tai)式(shi)離(li)心(xin)機(ji)、可(ke)調式(shi)移(yi)液器(qi)、1 ml 玻璃比色皿(min)、研(yan)缽(bo)、冰和(he)蒸(zheng)餾水(shui)。

粗酶(mei)液提(ti)取：

組織(zhi)：按(an)照組(zu)織質量(liang)（g）：提(ti)取液體(ti)積(ml)為 1：5~10 的比例（建議(yi)稱取(qu)約 0.1g 組(zu)織(zhi)，加入(ru) 1ml 提(ti)取液）進(jin)行冰浴勻(yun)漿(jiang)，8000g 4℃離(li)心(xin) 10min，取(qu)上(shang)清液待(dai)測(ce)。

細菌、真(zhen)菌：按(an)照細胞數量(liang)（104 個(ge)）：試劑壹體積（ml）為 500~1000：1 的比例（建議(yi) 500 萬細胞加入(ru) 1ml 提(ti)取液），冰(bing)浴超聲波(bo)破碎(sui)細胞（功率 300w，超聲 3 秒(miao)，間(jian)隔(ge) 7 秒(miao)，總(zong)時(shi)間(jian) 3min）；然後(hou) 8000g， 4℃，離(li)心(xin) 10min，取(qu)上(shang)清置(zhi)於冰上(shang)待(dai)測(ce)。

血清等液體(ti)：直(zhi)接(jie)測(ce)定(ding)。

測(ce)定(ding)操作：

分光(guang)光(guang)度(du)計(ji)預(yu)熱(re) 30 min，調節波長到(dao) 412 nm，蒸(zheng)餾水(shui)調零。

試劑二(er)置(zhi)於 37℃水浴中預熱(re) 30min。

取 1ml 玻(bo)璃比色皿(min)，依(yi)次(ci)加入(ru) 100μl 上(shang)清液、800 μl 試(shi)劑壹、50μl 試劑二(er)和(he) 50 μl 試(shi)劑三，迅(xun)速(su)混(hun)勻(yun)，於 412nm 處測(ce)定(ding) 3min 內吸光(guang)值(zhi)變化(hua)，第(di) 10s 吸光(guang)值(zhi)記(ji)為(wei)A1，第 190s 吸光(guang)值(zhi)記(ji)為(wei)A2。△A 測(ce)定(ding)管=A2-A1。

AchE 活(huo)性(xing)計(ji)算公式：

組織(zhi)AchE 活(huo)性(xing)

按(an)照蛋(dan)白濃(nong)度計(ji)算

活(huo)性(xing)單(dan)位定義：每(mei)毫(hao)克(ke)蛋白(bai)每(mei)分鐘催化(hua)產(chan)生(sheng) 1nmol TNB 的酶量(liang)為(wei) 1 個(ge)酶活(huo)單位(wei)。

AchE 酶活(huo)(nmol/min/mg prot)= (△A÷ε÷d×V 反總(zong)×109)÷（Cpr ×V 樣）÷T

= 245×△A÷Cpr

按(an)照樣本質量(liang)計(ji)算

活(huo)性(xing)單(dan)位定義：每(mei)克(ke)組織(zhi)每(mei)分鐘催化(hua)產(chan)生(sheng) 1nmol TNB 的酶量(liang)為(wei) 1 個(ge)酶活(huo)單位(wei)。

AchE 酶活(huo)(nmol/min/g 鮮(xian)重)= (△A÷ε÷d×V 反(fan)總(zong)×109)÷（W ×V 樣÷V 樣總(zong)）÷T

= 245×△A÷W

細菌、細胞AchE 活(huo)性(xing)

活(huo)性(xing)單(dan)位定義：每(mei) 104 個(ge)細胞每(mei)分鐘催化(hua)產(chan)生(sheng) 1nmol TNB 的酶量(liang)為(wei) 1 個(ge)酶活(huo)單位(wei)。

AchE 酶活(huo)(nmol/min/104 cell)= (△A÷ε÷d×V 反總(zong)×109)÷（細胞數量(liang)×V 樣÷V 樣總(zong)）÷T

= 245×△A÷細胞數量(liang)

血清AchE 活(huo)性(xing)

活(huo)性(xing)單(dan)位定義：每(mei)毫(hao)升血清每(mei)分鐘催化(hua)產(chan)生(sheng) 1nmol TNB 的酶量(liang)為(wei) 1 個(ge)酶活(huo)單位(wei)。

AchE 酶活(huo)(nmol/min /ml)= (△A÷ε÷d×V 反總(zong)×109)÷V 樣÷T

=245×△A

ε：TNB 摩(mo)爾(er)消(xiao)光(guang)系(xi)數，13.6×103 L/mol/cm；V 反(fan)總(zong)：反(fan)應體(ti)系(xi)總(zong)體(ti)積(ji)（L），1 ml=0.001 L；106：1mol=1×106μmol； V 樣總(zong)：加入(ru)提(ti)取液體(ti)積，1ml；Cpr：蛋白(bai)濃(nong)度（mg/ml）；W：樣本質量(liang)，g；V 樣：加入(ru)上(shang)清液體(ti)積（ml），

0.1 ml；T：反應時(shi)間(jian)（min），3 min。

乙酰(xian)dan堿酯酶(mei)活(huo)性(xing)測(ce)定(ding)試劑盒(he)