哺乳(ru)動(dong)物CarE，也(ye)稱脂(zhi)族(zu)酯(zhi)酶(mei)（aliesterase），廣泛(fan)分布於(yu)組(zu)織(zhi)和器(qi)官(guan)，屬(shu)於(yu)絲an酸(suan)水解(jie)酶(mei)家(jia)族(zu)。CarE催化含酯(zhi)鍵(jian)、酰胺鍵(jian)和硫酯鍵(jian)的內源性(xing)與(yu)外源性(xing)物(wu)質水解(jie)，但(dan)不能催化水解(jie)乙(yi)酰dan堿及(ji)其類(lei)似物(wu)。CarE 參(can)與(yu)脂(zhi)質運(yun)輸(shu)和代謝(xie)，並且與(yu)多種(zhong)藥(yao)物、環境(jing)毒物(wu)以及(ji)致(zhi)癌(ai)物(wu)的解毒(du)和代謝(xie)有(you)關(guan)，有(you)機(ji)磷(lin)農藥(yao)可(ke)結合並且抑制CarE 活(huo)性(xing)。
羧酸(suan)酯酶(mei)活(huo)性(xing)測定試(shi)劑(ji)盒(he)

羧(suo)酸(suan)酯酶(mei)（carboxylesterase，CarE）活(huo)性(xing)測定試(shi)劑(ji)盒(he)說(shuo)明(ming)書(shu)

分光光度(du)法(fa) 50 管(guan)/48 樣

羧(suo)酸(suan)酯酶(mei)活(huo)性(xing)測定試(shi)劑(ji)盒(he)

正(zheng)式測定前(qian)務(wu)必取(qu) 2-3 個(ge)預期(qi)差異(yi)較(jiao)大(da)的樣本預測定

測定意(yi)義(yi)：

哺乳(ru)動(dong)物CarE，也(ye)稱脂(zhi)族(zu)酯(zhi)酶(mei)（aliesterase），廣泛(fan)分布於(yu)組(zu)織(zhi)和器(qi)官(guan)，屬(shu)於(yu)絲an酸(suan)水解(jie)酶(mei)家(jia)族(zu)。CarE催化含酯(zhi)鍵(jian)、酰胺鍵(jian)和硫酯鍵(jian)的內源性(xing)與(yu)外源性(xing)物(wu)質水解(jie)，但(dan)不能催化水解(jie)乙(yi)酰dan堿及(ji)其類(lei)似物(wu)。CarE 參(can)與(yu)脂(zhi)質運(yun)輸(shu)和代謝(xie)，並且與(yu)多種(zhong)藥(yao)物、環境(jing)毒物(wu)以及(ji)致(zhi)癌(ai)物(wu)的解毒(du)和代謝(xie)有(you)關(guan)，有(you)機(ji)磷(lin)農藥(yao)可(ke)結合並且抑制CarE 活(huo)性(xing)。

測定原(yuan)理：

CarE 能催化乙酸(suan)-1-萘(nai)酯生成(cheng)萘酯(zhi)，固(gu)藍顯色(se)；在(zai) 450 nm 光(guang)吸收增(zeng)加速率(lv)，計算(suan)CarE 活(huo)性(xing)。

組(zu)成(cheng)：

試(shi)劑(ji)三(san)：粉劑(ji)×2 支， 4℃保(bao)存，臨用前(qian)取(qu) 1 支試(shi)劑(ji)三(san)，加 1.2ml 無水乙(yi)醇(chun)充分溶解；試劑(ji)四(si)：粉劑(ji)×2 支，-20℃保(bao)存，臨用前(qian)取(qu) 1 支試(shi)劑(ji)四(si)，加少(shao)量(liang)試(shi)劑(ji)二溶(rong)解(jie)；

工(gong)作(zuo)液(ye)配制：臨用前(qian)配制，向 1 瓶試劑(ji)二中(zhong)，加入溶解後(hou)的試劑(ji)三(san)和試劑(ji)四(si)各(ge) 1 支，充(chong)分溶解，過濾(lv)，4℃

避(bi)光保(bao)存，可用 1 周。

自(zi)備儀(yi)器(qi)和用品：

可(ke)見分光光度(du)計(ji)、臺式(shi)離(li)心(xin)機(ji)、可調式(shi)移(yi)液(ye)器(qi)、1 ml 玻璃(li)比(bi)色皿、研(yan)缽(bo)、冰和蒸餾水。

樣本的前(qian)處(chu)理(li)：

1、細菌、細胞(bao)樣品制備

收集細菌或細胞(bao)到離(li)心(xin)管(guan)內，離(li)心(xin)後(hou)棄(qi)上清(qing)；按(an)照每(mei) 200 萬細菌或細胞(bao)加入 400μl 試劑(ji)壹(yi)，超(chao)聲波破(po)碎細菌或細胞(bao)（功(gong)率(lv) 20％，超聲 3s，間隔(ge) 10s，重復 30 次）；12000g 4℃離(li)心(xin) 30min，取(qu)上清(qing)液(ye)待測。

2、組(zu)織(zhi)：按(an)照組(zu)織(zhi)質量(liang)（g）：試(shi)劑(ji)壹(yi)體(ti)積(ji)(ml)為 1：5~10 的比(bi)例(li)（建議(yi)稱取(qu)約(yue) 0.1g 組織(zhi)，加入 1ml 試劑(ji)壹(yi)）進(jin)行(xing)冰浴勻(yun)漿；12000g 4℃離(li)心(xin) 30min，取(qu)上清(qing)液(ye)待測。

3、液(ye)體：直接測定。

測定步(bu)驟：

分光光度(du)計(ji)預熱 30min，調節(jie)波長到 450 nm，蒸(zheng)餾(liu)水調零(ling)。

試(shi)劑(ji)二置(zhi)於(yu) 37℃水浴(yu)中(zhong)預熱 30 min。

空白管(guan)：取(qu) 1ml 玻璃(li)比(bi)色皿，依次加入 5μl 蒸餾水和 1000μl 試劑(ji)二，迅速混(hun)勻，於(yu) 450nm 處(chu)測定 3min

內吸光值變化，第 10s 吸光值記為(wei)A1，第 190s 吸光值記為(wei)A2。△A 空白管(guan)=A2-A1

測定管(guan)：取(qu) 1ml 玻璃(li)比(bi)色皿，依次加入 5μl 上清(qing)液(ye)和 1000μl 試劑(ji)二，迅速混(hun)勻，於(yu) 450nm 處(chu)測定 3min

內吸光值變化，第 10s 吸光值記為(wei)A3，第 190s 吸光值記為(wei)A4。△A 測定管(guan)=A4-A3註(zhu)意(yi)：空白管(guan)只(zhi)需(xu)測定壹(yi)次(ci)。

CarE 活(huo)性(xing)計算(suan)公(gong)式：

1、 組(zu)織(zhi)中(zhong) CarE 活(huo)性(xing)

按(an)照蛋白濃度(du)計(ji)算

單(dan)位(wei)的定義(yi)：每(mei)mg 組織(zhi)蛋白在 37℃反應體系(xi)中(zhong)每(mei)分鐘催化吸光值增加 1 定義(yi)為 1 個(ge)酶(mei)活(huo)單(dan)位(wei)。

CarE 酶(mei)活(huo)(U/mg prot)= (△A 測定管(guan)-△A 空白管(guan)) ×V 反總÷(Cpr×V 樣)÷T

= 67×(△A 測定管(guan)-△A 空白管(guan))÷Cpr

Cpr：蛋白質濃度(du)，mg/ml；V 樣：加入上清(qing)液(ye)體積(ji)，0.005 ml；T：反應時間，3min。V 反總：1.005ml；蛋白質濃度(du)需(xu)要(yao)另(ling)外測定，建議(yi)使(shi)用本公(gong)司(si)BCA 蛋白質含量(liang)測定試(shi)劑(ji)盒(he)。

按(an)照樣品質量(liang)計(ji)算

單(dan)位(wei)的定義(yi)：每(mei)g 組織(zhi)在 37℃反應體系(xi)中(zhong)每(mei)分鐘催化吸光值增加 1 定義(yi)為 1 個(ge)酶(mei)活(huo)單(dan)位(wei)。

CarE 酶(mei)活(huo)(U/g 鮮(xian)重)= (△A 測定管(guan)-△A 空白管(guan)) ×V 反總×（V 樣總÷V 樣）÷W÷T

= 67×(△A 測定管(guan)-△A 空白管(guan))÷W

V 樣總：上清(qing)液(ye)總體(ti)積(ji)，1 ml；V 樣：加入上清(qing)液(ye)體積(ji)(ml)，0.005 ml；V 反總：1.005ml；W：樣品質量(liang)（g）；

T：反應時間（min）3min。

2、 細菌或細胞(bao)中(zhong) CarE 活(huo)性(xing)

單(dan)位(wei)的定義(yi)：每(mei) 1 萬個(ge)細菌或細胞(bao)在 37℃反應體系(xi)中(zhong)每(mei)分鐘催化吸光值增加 1 定義(yi)為 1 個(ge)酶(mei)活(huo)單(dan)位(wei)。

CarE 酶(mei)活(huo)(U/104 cell)= (△A 測定管(guan)-△A 空白管(guan)) ×V 反總×（V 樣總÷V 樣）÷細胞(bao)密(mi)度(du)（104 cell/ml）÷T

= 67×(△A 測定管(guan)-△A 空白管(guan))÷細胞(bao)密(mi)度(du)（104 cell/ml）

V 總：上清(qing)液(ye)總體(ti)積(ji)，1 ml；V 樣：加入上清(qing)液(ye)體積(ji)(ml)，0.005 ml；V 反總：1.005ml ；T：反應時間（min），

3min。

3、 液(ye)體中(zhong) CarE 活(huo)性(xing)

單(dan)位(wei)的定義(yi)：每(mei)毫(hao)升(sheng)樣品在 37℃反應體系(xi)中(zhong)每(mei)分鐘催化吸光值增加 1 定義(yi)為 1 個(ge)酶(mei)活(huo)單(dan)位(wei)。

CarE 酶(mei)活(huo)(U/ml )= (△A 測定管(guan)-△A 空白管(guan)) ×V 反總÷V 樣÷T

= 67×(△A 測定管(guan)-△A 空白管(guan))

V 樣總：上清(qing)液(ye)總體(ti)積(ji)，1 ml；V 樣：加入上清(qing)液(ye)體積(ji)(ml)，0.005 ml；V 反總：1.005ml；T：反應時間（min），

3min。

羧(suo)酸(suan)酯酶(mei)活(huo)性(xing)測定試(shi)劑(ji)盒(he)