在酸(suan)性(xing)環(huan)境(jing)中，ACP 催(cui)化(hua)對(dui)硝基(ji)苯(ben)磷酸二(er)鈉水(shui)解生成 4-硝(xiao)基(ji)苯fen，在 405nm 有(you)特征(zheng)光吸收；通過(guo)測(ce)定 405nm 吸光度(du)增加(jia)速率，來(lai)計算(suan)ACP 活(huo)性(xing)。
酸(suan)性(xing)磷酸酶(mei)ACP活(huo)性(xing)測(ce)定試劑盒(he) 酯(zhi)酶(mei)系(xi)列(lie)

酸性(xing)磷酸酶(mei)（ACP）活(huo)性(xing)測(ce)定試劑盒(he)說明(ming)書(shu)

分光光度(du)法 50 管(guan)/24 樣(yang)

酸性(xing)磷酸酶(mei)ACP活(huo)性(xing)測(ce)定試劑盒(he) 酯(zhi)酶(mei)系(xi)列(lie)

正(zheng)式(shi)測(ce)定前(qian)務(wu)必取 2-3 個預(yu)期(qi)差(cha)異較大的(de)樣(yang)本做預(yu)測(ce)定測(ce)定意義：

ACP 在酸(suan)性(xing)條(tiao)件(jian)下(xia)催(cui)化(hua)磷酸單(dan)酯(zhi)水(shui)解(jie)稱(cheng)無(wu)機(ji)磷酸，常jian於(yu)巨(ju)噬細胞的溶(rong)酶體(ti)內(nei)。ACP 常用於(yu)前列腺癌的輔(fu)助診(zhen)斷(duan)。

測(ce)定原(yuan)理：

在酸(suan)性(xing)環(huan)境(jing)中，ACP 催(cui)化(hua)對(dui)硝基(ji)苯(ben)磷酸二(er)鈉水(shui)解生成 4-硝基(ji)苯fen，在 405nm 有(you)特征(zheng)光吸收；通過(guo)測(ce)定 405nm 吸光度(du)增加(jia)速率，來(lai)計算(suan)ACP 活(huo)性(xing)。

組成：

自備(bei)儀(yi)器(qi)和(he)用品(pin)：

可見(jian)分光光度(du)計、臺式(shi)離(li)心機(ji)、分析天平、可調式(shi)移(yi)液器、1ml 玻璃比色(se)皿(min)、冰(bing)、可調式(shi)移(yi)液器和蒸餾水。

粗酶(mei)液提取(qu)：

組織(zhi)：按照(zhao)組(zu)織(zhi)質量(liang)（g）：試劑壹體(ti)積(ml)為 1：5~10 的(de)比例（建議稱取(qu)約(yue) 0.1g 組(zu)織(zhi)，加入 1ml 試劑壹）進行冰(bing)浴(yu)勻漿(jiang)，4℃、10000g 離(li)心 10min，取(qu)上(shang)清(qing)液待測(ce)。

細菌或細(xi)胞：按照(zhao)細(xi)菌或細(xi)胞數量（104 個(ge)）：試劑壹體(ti)積（ml）為 500~1000：1 的(de)比例（建議 500 萬細(xi)胞加入(ru) 1ml 試劑壹），冰(bing)浴(yu)超聲(sheng)波(bo)破(po)碎(sui)細(xi)胞（功率 300w，超聲(sheng) 3 秒(miao)，間(jian)隔(ge) 7 秒(miao)，總時(shi)間(jian) 3min）；然(ran)後(hou) 10000g，4℃，離(li)心 10min，取(qu)上(shang)清(qing)置(zhi)於(yu)冰(bing)上待測(ce)。

血液可直(zhi)接測(ce)定，或(huo)者適當稀(xi)釋(shi)後測(ce)定。

測(ce)定：

分光光度(du)計預(yu)熱 30 min，調節(jie)波(bo)長(chang)到(dao) 405 nm。

在 EP 管(guan)中加(jia)入(ru)下(xia)列試劑

混(hun)勻，吸取 1 ml 加入玻璃比色(se)皿(min)中，405 nm 下(xia)測(ce)定各(ge)管(guan)吸光值。ΔA=A 測(ce)定管(guan)-A 對(dui)照(zhao)管(guan)。

註意：每(mei)個測(ce)定管(guan)需(xu)做(zuo)壹個(ge)對(dui)照(zhao)管(guan)。

ACP 活(huo)性(xing)計算(suan)：

標準曲(qu)線(xian) y = 14.6672x + 0.0179；R2 = 0.9996；x 為標準品(pin)濃(nong)度(du)（μmol/ml），y 為吸光值ΔA。

血液中ACP 活(huo)性(xing)計算(suan)

活(huo)性(xing)單(dan)位定(ding)義：30℃中每(mei)毫升血液每(mei)分鐘催(cui)化(hua)產(chan)生 1μmol 4-硝基(ji)苯fen定義為(wei) 1 個(ge)酶活(huo)單(dan)位。

ACP 活(huo)力(μmol/min/ml)=（ΔA-0.0179）÷14.6672 ×V 反總÷T÷V 樣(yang)

= 0.2273 ×（ΔA-0.0179）

組織(zhi)、細菌或細(xi)胞中 ACP 活(huo)性(xing)計算(suan)

按照(zhao)蛋白濃(nong)度(du)計算(suan)

活(huo)性(xing)單(dan)位定(ding)義：30℃中每(mei)毫克蛋白每(mei)分鐘催(cui)化(hua)產(chan)生 1 μmol 4-硝基(ji)苯fen定義為(wei) 1 個(ge)酶活(huo)單(dan)位。

ACP 活(huo)力(μmol/min/mg prot)=(ΔA-0.0179)÷14.6672×V 反總÷T÷(V 樣(yang)×Cpr)

=0.2273 ×（ΔA-0.0179）÷Cpr

按照(zhao)樣(yang)本質量(liang)計算(suan)

活(huo)性(xing)單(dan)位定(ding)義：30℃中每(mei)克組織(zhi)每(mei)分鐘催(cui)化(hua)產(chan)生 1 μ mol 4-硝基(ji)苯fen定義為(wei) 1 個(ge)酶活(huo)單(dan)位。

ACP 活(huo)力 (μmol/min/g 鮮(xian)重(zhong))=(ΔA-0.0179)÷14.6672×V 反總÷T÷(W×V 樣(yang)÷V 樣(yang)總(zong))

= 0.2273 ×（ΔA-0.0179）÷W

按照(zhao)細(xi)菌或細(xi)胞數量計算(suan)

活(huo)性(xing)單(dan)位定(ding)義：30℃中每(mei) 104 個細菌或細(xi)胞每(mei)分鐘催(cui)化(hua)產(chan)生 1 μ mol 4-硝基(ji)苯fen定義為(wei) 1 個(ge)酶活(huo)單(dan)位。

ACP 活(huo)力 (μmol/min/104 cell)=(ΔA-0.0179)÷14.6672 ×V 反總÷T ÷（細(xi)胞數量×V 樣(yang)÷V 樣(yang)總(zong)）

= 0.2273 ×（ΔA-0.0179）÷細胞數量

V 反總：反應體(ti)系(xi)總(zong)體積(ji)（ml），1 ml； W ：樣(yang)品(pin)質量(liang)，g； V 樣(yang)：加(jia)入(ru)反應體(ti)系(xi)中樣(yang)本體積（ml），

0.01 ml；V 樣(yang)總(zong)：提取(qu)液體積，1 ml；T：反應時(shi)間(jian)（min），30 min；500：細(xi)胞或細(xi)菌總數，500 萬。

註意事項：

ACP 不穩定，尤(you)其(qi)在 37℃和(he)pH 大於(yu) 7 的條(tiao)件(jian)下(xia)活(huo)力喪失快(kuai)，因此酸性(xing)磷酸酶(mei)樣(yang)品(pin)壹般(ban)需當天準備(bei)；血清(qing)樣(yang)品(pin)中，每(mei)毫升血清(qing)中加(jia)入(ru) 10mg 檸檬(meng)酸氫(qing)二(er)鈉或(huo)者 5mg 硫(liu)酸氫(qing)鈉，使(shi)pH 降(jiang)至(zhi) 6.5 以(yi)下(xia)，或(huo) 5ml 血清(qing)加入(ru) 30%醋酸(suan)溶液 2～3 滴(di)，置(zhi)於(yu) 4℃可保(bao)存 1 周(zhou)。

酸性(xing)磷酸酶(mei)ACP活(huo)性(xing)測(ce)定試劑盒(he) 酯(zhi)酶(mei)系(xi)列(lie)