在堿(jian)性(xing)環(huan)境(jing)中，AKP/ALP 催(cui)化(hua)磷(lin)酸苯二鈉生成遊離酚；酚(fen)與(yu) 4-氨基安ti比林(lin)和鐵(tie)qing化(hua)鉀反(fan)應(ying)紅色ya醌(kun)衍(yan)生物(wu)，在 510nm 有(you)特征(zheng)光吸(xi)收(shou)；通(tong)過(guo)測定(ding) 510 nm 吸(xi)光度增(zeng)加(jia)速(su)率(lv)，來計(ji)算(suan)AKP 活(huo)性(xing)。
堿(jian)性(xing)磷(lin)酸(suan)酶活(huo)性(xing)測(ce)定(ding)試(shi)劑盒 酯酶(mei)系列

堿(jian)性(xing)磷(lin)酸(suan)酶（alkaline phosphatase，AKP/ALP）活(huo)性(xing)測(ce)定(ding)試(shi)劑盒

分光光度法(fa) 50 管/24 樣

堿(jian)性(xing)磷(lin)酸(suan)酶活(huo)性(xing)測(ce)定(ding)試(shi)劑盒 酯酶(mei)系列

正(zheng)式(shi)測定(ding)前(qian)務必(bi)取 2-3 個(ge)預期(qi)差異(yi)較(jiao)大(da)的(de)樣本做預測定(ding)測(ce)定(ding)意(yi)義：

AKP/ALP 是壹種(zhong)含鋅(xin)的糖(tang)蛋(dan)白(bai)酶，在堿(jian)性(xing)環(huan)境(jing)中可水解各(ge)種(zhong)天然及人(ren)工(gong)合(he)成的(de)磷(lin)脂(zhi)單酯化(hua)合(he)物(wu)。

AKP/ALP 廣(guang)泛分布(bu)於(yu)人體(ti)各(ge)臟(zang)器中，以(yi)肝(gan)臟(zang)為主(zhu)。

測定(ding)原理(li)：

在堿(jian)性(xing)環(huan)境(jing)中，AKP/ALP 催化(hua)磷(lin)酸苯二鈉生成遊離酚；酚(fen)與(yu) 4-氨基安ti比林(lin)和鐵(tie)qing化(hua)鉀反(fan)應(ying)紅色ya醌(kun)衍(yan)生物(wu)，在 510nm 有(you)特征(zheng)光吸(xi)收(shou)；通(tong)過(guo)測定(ding) 510 nm 吸(xi)光度增(zeng)加(jia)速(su)率(lv)，來計(ji)算(suan)AKP 活(huo)性(xing)。

組(zu)成：

試劑四(si)：液(ye)體(ti)×1 瓶，4℃避(bi)光保(bao)存，未變成藍(lan)綠(lv)色之前(qian)均可使用(yong)。標準(zhun)品(pin)：液(ye)體(ti)×1 支(zhi)（EP 管(guan)中），2 μ mol/ml 酚(fen)標(biao)準(zhun)液，4℃保存。

自(zi)備(bei)儀(yi)器和(he)用(yong)品(pin)：

可見分光光度計(ji)、臺式離心機(ji)、水(shui)浴鍋、可調式(shi)移液(ye)器(qi)、1ml 玻璃(li)比色皿和蒸(zheng)餾水。

粗(cu)酶液提(ti)取：

組(zu)織：按照(zhao)組(zu)織質(zhi)量（g）：試(shi)劑壹體(ti)積(ji)(ml)為 1：5~10 的(de)比例(li)（建議稱(cheng)取(qu)約(yue) 0.1g 組(zu)織，加(jia)入 1ml 試劑(ji)壹(yi)）進(jin)行(xing)冰(bing)浴勻漿(jiang)，4℃、8000g 離心 10min，取(qu)上清液(ye)待測。

細菌或(huo)細胞：按照(zhao)細菌(jun)或(huo)細胞數量（104 個(ge)）：試劑壹(yi)體(ti)積(ji)（ml）為 500~1000：1 的(de)比例(li)（建議 500 萬細(xi)胞(bao)加(jia)入 1ml 試劑(ji)壹(yi)），冰(bing)浴(yu)超(chao)聲(sheng)波破(po)碎(sui)細胞(bao)（功率(lv) 300w，超聲 3 秒(miao)，間隔(ge) 7 秒(miao)，總(zong)時間 3min）；然後 8000g，4℃，離心 10min，取(qu)上清置(zhi)於冰(bing)上待測。

血液可直接測定(ding)，或(huo)者適(shi)當(dang)稀釋後測定(ding)。

測定(ding)步驟：

分光光度計(ji)預(yu)熱(re) 30min，調節波長到 510 nm，蒸(zheng)餾水調零(ling)。

試劑三(san)置於(yu) 37℃水浴(yu)中預(yu)熱(re) 30 min。

空白(bai)管：取(qu) EP 管，加(jia)入 20μl 蒸(zheng)餾水，200μl 試(shi)劑二，200μl 試(shi)劑(ji)三(san)，混勻(yun)後置於(yu) 37℃水浴中保(bao)溫 15min；加(jia)入試劑(ji)四(si) 600μl，混勻(yun)後於 510 nm 測(ce)定(ding)吸(xi)光度，記(ji)為A 空(kong)白(bai)管。

標準(zhun)管：取 EP 管，加(jia)入 20μl 標準(zhun)品(pin)，200μl 試(shi)劑(ji)二(er)，200μl 試(shi)劑三(san)，混勻(yun)後置於(yu) 37℃水浴中保(bao)溫 15min；

加(jia)入試劑(ji)四(si) 600μl，混勻(yun)後於 510 nm 測(ce)定(ding)吸(xi)光度，記(ji)為A 標(biao)準(zhun)管。

對照(zhao)管：取(qu) EP 管(guan)，加(jia)入 20μl 上清液(ye)，200μl 蒸(zheng)餾水，200μl 試(shi)劑三(san)，混勻(yun)後置於(yu) 37℃水浴中保(bao)溫 15min；加(jia)入試劑(ji)四(si) 600μl，混勻(yun)後於 510 nm 測(ce)定(ding)吸(xi)光度，記(ji)為A 測(ce)定(ding)管(guan)。

測定(ding)管(guan)：取 EP 管，加(jia)入 20μl 上清液(ye)，200μl 試劑(ji)二(er)，200μl 試劑(ji)三(san)，混勻(yun)後置於(yu) 37℃水浴中保(bao)溫 15min；

加(jia)入試劑(ji)四(si) 600μl，混勻(yun)後於 510 nm 測(ce)定(ding)吸(xi)光度，記(ji)為A 測(ce)定(ding)管(guan)。

註(zhu)意(yi)：空(kong)白(bai)管和(he)標準(zhun)管只需(xu)測定(ding)壹(yi)次。每個(ge)測定(ding)管(guan)設(she)壹個(ge)對照(zhao)管。

AKP/ALP 活(huo)性(xing)計(ji)算(suan)：

血液中AKP/ALP 活(huo)力(li)計(ji)算(suan)

活(huo)性(xing)單(dan)位(wei)定(ding)義(yi)：37℃中每毫升(sheng)血(xue)液每分鐘催化(hua)產生 1μmol 酚(fen)定(ding)義(yi)為 1 個(ge)酶活(huo)單(dan)位(wei)。

AKP/ALP 活(huo)力(li)(μmol/min /ml)= [C 標(biao)準(zhun)品(pin)×(A 測(ce)定(ding)管(guan)-A 對照(zhao)管)÷(A 標(biao)準(zhun)管-A 空白(bai)管)×V 反(fan)總(zong)] ÷V 樣

÷T=6.8×(A 測定(ding)管(guan)-A 對照(zhao)管)÷(A 標(biao)準(zhun)管-A 空白(bai)管)

組(zu)織、細菌或(huo)細胞中AKP/ALP 活(huo)性(xing)計(ji)算(suan)

按照(zhao)蛋白(bai)濃(nong)度計(ji)算(suan)

活(huo)性(xing)單(dan)位(wei)定(ding)義(yi)：37℃中每毫克蛋白(bai)每分鐘催化(hua)產生 1 μ mol 酚(fen)定(ding)義(yi)為 1 個(ge)酶活(huo)單(dan)位(wei)。 AKP/ALP(μmol/min/mg prot)=[C 標準(zhun)品(pin)×(A 測(ce)定(ding)管(guan)-A 對照(zhao)管)÷(A 標(biao)準(zhun)管-A 空白(bai)管)×V 反(fan)總(zong)]÷(Cpr×V樣)÷T=6.8×(A 測定(ding)管(guan)-A 對照(zhao)管)÷(A 標(biao)準(zhun)管-A 空白(bai)管) ÷Cpr

按照(zhao)樣本質(zhi)量計(ji)算(suan)

活(huo)性(xing)單(dan)位(wei)定(ding)義(yi)：37℃中每克組(zu)織每分鐘催化(hua)產生 1 μ mol 酚(fen)定(ding)義(yi)為 1 個(ge)酶活(huo)單(dan)位(wei)。

AKP/ALP(μmol/min/g 鮮(xian)重)=[C 標(biao)準(zhun)品(pin)×(A 測(ce)定(ding)管(guan)-A 對照(zhao)管)÷(A 標(biao)準(zhun)管-A 空白(bai)管)×V 反(fan)總(zong)]÷(W×V 樣÷V樣總(zong))÷T=6.8×(A 測定(ding)管(guan)-A 對照(zhao)管)÷(A 標(biao)準(zhun)管-A 空白(bai)管) ÷W

按照(zhao)細菌(jun)或(huo)細胞數量計(ji)算(suan)

活(huo)性(xing)單(dan)位(wei)定(ding)義(yi)：37℃中每 104 個(ge)細菌或(huo)細胞每分鐘催化(hua)產生 1 μ mol 酚(fen)定(ding)義(yi)為 1 個(ge)酶活(huo)單(dan)位(wei)。AKP/ALP (μmol/min/104 cell)= [C 標準(zhun)品(pin)×(A 測(ce)定(ding)管(guan)-A 對照(zhao)管)÷(A 標(biao)準(zhun)管-A 空白(bai)管)×V 反(fan)總(zong)]÷(細胞(bao)數量×V 樣÷V 樣總(zong))÷T= 6.8×(A 測定(ding)管(guan)-A 對照(zhao)管)÷(A 標(biao)準(zhun)管-A 空白(bai)管) ÷細(xi)胞數量

C 標準(zhun)品(pin)：2μmol/ml；V 反(fan)總(zong)：反(fan)應(ying)體(ti)系(xi)總(zong)體(ti)積(ji)（ml），1020μl=1.02 ml； V 樣：加(jia)入反(fan)應(ying)體(ti)系(xi)中上清液(ye)體(ti)積(ji)（ml），0.020ml；V 樣總(zong)：加(jia)入提(ti)取液(ye)體(ti)積(ji)，1ml；T：反(fan)應(ying)時間（min），15 min。

註(zhu)意(yi)事(shi)項(xiang)：

試劑二(er)、試(shi)劑(ji)三(san)和試(shi)劑四(si)均需(xu)避(bi)光保(bao)存。

試劑四(si)變藍(lan)綠(lv)色後不(bu)能(neng)再(zai)使用(yong)。

加(jia)入試劑(ji)四(si)後必須(xu)立即混勻(yun)，否(fou)則(ze)顯(xian)色不(bu)wan全(quan)。

堿(jian)性(xing)磷(lin)酸(suan)酶活(huo)性(xing)測(ce)定(ding)試(shi)劑盒 酯酶(mei)系列